HPLC-光散射法测定复方沙太合剂中黄芪甲苷的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC-光散射法测定复方沙太合剂中黄芪甲苷的含量 梅文君 李允武 吴飞华 　　（上海交通大学医学院附属第九人民医院 上海 200011） 　　【摘要】目的:建立高效液相色谱－光散射法测定复方沙太合剂中黄芪甲苷的含量。方法：色谱柱：SHISEIDOC（4.6mmtimes;250mm，5mu;m）；流动相：乙腈－水（34:66）；1.0ml/min；柱温：30℃；光散射检测器参数：漂移管温度：90℃；雾化器温度：50℃；载气：氮气（0.99999%），流量：1.2 SLPM（标准升/每分钟）。结果：黄芪甲苷在23.25-372.00mu;g范围内呈线性，平均回收率为99.28%（RSD=1.5%）。结论：本法有良好的精密度和重现性测定结果准确可靠，可作为复方沙太合剂的质量控制方法。 　　【关键词】 复方沙太合剂 黄芪甲苷 HPLC 光散射法 　　【中图分类号】R94 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2014）17-0361-01 　　复方沙太合剂是我院特色制剂，由南沙参、太子参、黄芪、地黄、石斛、麦冬、枸杞子等十二味药组成，具滋阴润燥、养阴清热、益气健脾功能。用于治疗舍格伦综合症侵入外分泌腺为主的自身免疫、口干等。其中黄芪为君药，黄芪甲苷为其主要成分。黄芪甲苷的含量测定可采用薄层扫描法，但该法操作繁琐，重现性差。本文采用HPLC—光散射法测定法测定复方沙太合剂中黄芪甲苷的含量，稳定性及重现性良好，测定结果准确可靠，可有效控制复方沙太合剂的质量。 　　1 仪器和试剂 　　Waters2695型高效液相色谱仪，PL-ELS2100型光散射检测仪。乙腈（色谱纯），二级反渗透重蒸馏水（新鲜配制）。其它试剂为分析纯。黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。复方沙太合剂（上海交通大学医学院附属第九人民医院配制批号：130619、130703、130718）。 　　2 方法和结果 　　2.1色谱条件 色谱柱：SHISEIDOC（4.6mmtimes;250mm㎜，5mu;m）；流动相：乙腈-水（34:66）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；光散射检测器条件：漂移管温度：90℃；雾化器温度：50℃；载气：氮气（0.99999%），流量：1.2SLPM（标准升/每分钟）。 　　2.2对照品溶液的配制 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含197.6mu;g的溶液，作为对照品溶液。 　　2.3供试品预处理 精密量取本品50ml，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，既得。 　　2.4空白试验 按供试品预处理方法，提取空白溶液（处方中不含黄芪），采用2.1项的色谱条件，进行测定。在同一时间没有相应的峰出现，证明空白的样品不干扰测定。 　　2.5线性范围 分别精密量取对照品溶液0.125ml，0.25ml，0.5ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10mu;l，依次注入高效液相色谱—光散射检测仪，按2.1项色谱条件测定峰面积，以进样量（mu;g）的自然对数为横坐标，峰面积的自然对数为纵坐标，作标准曲线，回归方程为y=1.7926x-2.2994（相对系数r=0.9993），进样量在23.25-372.00mu;g范围内线性关系良好。 　　2.6精密度试验 精密量取对照品溶液10mu;l，一式5份进样，测得峰面积积分值的RSD为0.41%。 　　2.7稳定性试验 取供试品溶液分别在0、0.7、4.5、7.5和17小时进样测定，测得峰面积积分值的平均值的RSD为0.31%。 　　2.8重现性试验 取同一批次样品，一式5份，按供试品预处理方法操作，上述色谱条件测定，计算，结果黄芪甲苷的平均含量的RSD为1.7%。 　　2.9回收率试验 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶液制成每1ml含112.64mu;g的溶液作为加样对照品溶液，精密量取已知含量的样品25ml，精密加入对照品溶液10mu;l，按供试品溶液配制方法操作，上述色谱条件测定，计算，结果见表1。 　　表1 加样回收率试验结果 　　 　　3 讨论 　　3.1关于供试品预处理方法中正丁醇提取次数的考察，结果表明提取2次与提取7次测定的黄芪甲苷峰面积数据均不理想，而提取3次与提取5次测定的黄芪甲苷峰面积数据相差不大，考虑到实验室工作效率，因此将正丁醇提取次数定为3次。 　　3.2黄芪中黄芪甲