维生素B2测定.pptVIP

荧光法测定维生素B2 一、实验目的 荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2 学会使用荧光光度计 二、实验原理 维生素B2（又叫核黄素，VB2） 是橘黄色无臭的针状结晶 易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂 在中性或酸性溶液中稳定 光照易分解，对热稳定 二、实验原理 二、实验原理 在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。 维生素B2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大， 在pH=11的碱性溶液中荧光消失， 荧光分光光度法 四、实验步骤 了解荧光光度计的基本操作，调节仪器到工作状态。 设置激发波长为440nm，发射波长为540 nm，灵敏度＝2，入射缝宽和出射缝宽均为10nm。 四、实验步骤 (1)标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定：  标准液：0.50、1.00、1.50，2.00，2.50，3.00ml 冰醋酸：2.00 ml 浓度：0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ug/ml 从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度 四、实验步骤 （2）未知样的测定 多维葡萄糖粉试样：1.3368g 冰醋酸：2.00 ml 用测定标准系列时相同的条件，平行测量其荧光强度3次 五、实验数据处理 以维生素B2的浓度为横坐标，相对荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。 根据测得的被测样品的相对荧光强度含量在标准曲线上确定其浓度。