高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)突变体的构建及活性鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医 2013年第40卷第6期 生物技术 ·1· ·_．IL_o Ej IaJ 致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nspl蛋白锌指 结构1(ZFl)突变体的构建及活性鉴定 赵鹏伟1，2，u，吴家强2，u，杜以军2，v。李俊2，u，孙文博2一，丛晓燕2…， 时建立2-v，彭军2．u，于江2一，刘月月2．v，王金宝1’2-3 (1．青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109；2．山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100； 3．山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东济南250100) blotting 行定点突变，成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞，通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western 分布在细胞核中。Westernblotting结果显示，Flag抗体检测时，s突变体出现大小约为44和20ku条带，A突变体出现约为 44 ku条带，A突变体出现大小约为44ku条带。试验结果表明，本 ku条带；Myc抗体检测时，S突变体出现大小约为44和27 试验成功构建了Nspl突变体的真核表达质粒，证实其能在真核细胞中表达，为进一步研究Nspl蛋白的锌指结构是否对机体 I型IFN产生起下调作用提供基础。 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SX一1株；Nspl；突变体构建；活性鉴定 中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2013)06—0001—06 非结构蛋白(non—structural 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征 protein，Nsp)，分别为 and syn— 病毒(porcinereproductiverespiratory drome virus，PRRSV)引起的一种严重危害养猪业 ORFlb编码的聚合蛋白被分割为4个非结构蛋白： 的高度传染性疾病(Baustista等，1996)，该病毒感 染后可致母猪流产、返情、产死胎或弱胎、仔猪死亡 及各种年龄猪不同程度的呼吸道症状，且能破坏猪 程中有4种主要病毒蛋白调节机体的免疫反应(即 的免疫系统引起混合感染(Halbur等，1996)。1987 年美国首次报道该病，并在全美迅速蔓延，随后在短 不完全免疫应答，进一步抵抗宿主的先天性免疫反 短几年内，迅速遍及全球。PRRSV属于动脉炎病毒应，特别是能抑制I型干扰素(IFN)的产生，从而影 属，是一种不分节段的单股正链RNA病毒，大小约 响宿主获得性免疫的产生，导致细胞免疫持续时间 15 短、病毒特异性IFN一7分泌细胞减少和持续的病毒 kb，含有9个开放阅读框(ORFs)，ORFl编码非结 构蛋白，ORF2～ORF7编码结构蛋白。ORFla编码 产物为聚合蛋白，可被自身编码的蛋白酶切割成9个 存在自身裂解酶，能裂解成大小为20(Nspld)和 27 收稿liit期：2012-1卜20 IRF3和干扰素启动子的活性，在细胞核降解CREB 作者简介：赵鹏伟(1986一)，男，山东人，硕士生，研究方向：动物 AMP element (cyclicresponse binding)结合蛋白， 微生物与免疫学。 从而抑制工型干扰素的分泌和产生(Kim等， 通信作者：王金宝(1962一)，男，山东人，教授，博士，