原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
·
·
生堡生物匡堂王程象盍垫!!生生且箍12鲞箍2期gh迪J壁i鲤鲤E磐，纯鲤垫!!，№!：12，№：2 115
·论著·
携带靶向干扰小鼠早期生长反应基因1
短发夹RNA的慢病毒载体转染小鼠
视网膜的干扰效率研究
蒋晶晶 刘双珍文丹王沙
【摘要】 目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)和靶向干扰早期生长反应基因1(Egr—1)短发夹
RNA(shRNA)共表达的慢病毒载体，转染小鼠视网膜组织，观察其对Egr-1基因的干扰效率。方法针
shRNA的慢病毒载
对已经筛选确定的Egr．1基因shRNA有效靶序列，构建携带GFP和靶向干扰Egr．1
体LV．shRNA(Egr．1)。15日龄C57BL／6小鼠完全随机法分为实验组和阴性对照组，每组10只。LV．
shRNA(Egr．1)慢病毒载体经玻璃体腔注射转染至实验组小鼠右眼内，不针对任何特异基因的LV—Nc
慢病毒载体通过同样的转染途径转染至阴性对照组小鼠右眼内，实验组及阴性对照组小鼠左眼不做任
何处理设为空白对照组。2周后荧光显微镜下观察转染情况，实时定量PCR(RQ．PCR)、免疫印迹
(Western
blot)、免疫荧光检测Egr—l的表达，观察Egr-1基因的干扰效率。结果慢病毒载体经玻璃体
腔注射途径转染小鼠视网膜后，GFP广泛分布于视网膜全层，包括视网膜色素上皮层。与空白对照组
mRNA表达明显下调(0．2904-0．074比
和阴性对照组注射眼比较，RQ．PCR检测显示实验组注射眼Egr-1
1．006+0．033、1．010±0．086，均PO．001)，抑制率为71．29％；免疫印迹显示实验组注射眼内Egr．1蛋白表
实验组注射眼在视网膜除内核层有少许Egr．1阳性细胞分布外，没有荧光表达。结论成功构建携带
绿色荧光蛋白和靶向干扰Egr-1基因shRNA的慢病毒载体，经玻璃体腔注射转染小鼠眼内其转染效率
高，分布范围广，且对小鼠视网膜Egr-1基因抑制效率高。
【关键词】早期生长反应基因1；RNA干扰；转染；慢病毒载体；基因表达调控
of interferenceon factor一1lentivirusvector
Efficiencytargeted earlygrowthresponse by containing
shRNAtrat僦ectedinto咖l脚retJlla
South 410008，China
ofOphthalmology，XiangyaHospital，CentralUniversity，Changsha
Correspondingauthor：LIUShuang-zhen，Email：liusbzhxy@163．com
Toconstructthelentivirusvector fluorescent
【Abstract】Objective containinggreen protein
factor一1short todeterminethe
(GFP)andgrowth hairpin shRNA)，and
early response
文档评论（0）