核磁共振氢谱测定羟丙基-倍他-环糊精的平均取代度.docVIP

精品论文 参考文献 核磁共振氢谱测定羟丙基-倍他-环糊精的平均取代度 宋元德1 梁敏2 　　（1辽阳市食品药品检验所 辽宁辽阳 111000） 　　（2石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 河北石家庄 050051） 　　【摘要】目的 建立测定无对照品或者指示剂的羟丙基-倍他-环糊精的平均取代度的快速、专属、简单的核磁共振氢谱方法。方法Bruker AVANCE III 600 MHz核磁共振谱仪,在25℃、以重水为溶剂、观测频率600.137 MHz、谱宽：4200Hz、90度脉冲宽度 10.06mu;s、脉冲延迟时间 1s、采样时间 3s、高斯增宽因子 0、线增宽因子0.2和采样次数64次的条件下采集试样的氢谱。结果 分别对5.3-4.85 ppm（葡萄糖环上的氢）和1.2-1.0 ppm（羟丙基上的甲基氢）的积分面积比，测定的重复性实验的RSD为0.08%（n=6）。结论 分析结果表明，在没有对照品或者指示剂的情况下，核磁共振氢谱法，可以用于羟丙基-倍他-环糊精的平均取代度的测定和质量控制。 　　【关键词】核磁共振 羟丙基-倍他-环糊精 取代度 　　【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）31-0087-02 　　1引言 　　环糊精（cyclodextrin, CD）是由数个D-吡喃葡萄糖构成的环状低聚糖，环糊精的最显著的特征是具有一个腔外亲水、腔内疏水并且具有一定尺寸的立体手性空腔。beta;-环糊精(beta;-CD)是由七个D-吡喃葡萄糖构成的环状低聚糖。目前，beta;-环糊精在医药领域有着广泛的应用，例如：提高药物分子的水溶性、稳定性等[1,2]。通过安全性试验证明环糊精毒性低，口服环糊精是安全有效的。但beta;-环糊精胃肠外给药有一定毒性，经肌肉给药后能形成溃疡，静脉给药可导致肾脏毒性和溶血作用[3]。为了解决静脉给药安全性、提高溶解性，需要对beta;-环糊精进行修饰，羟丙基-倍他-环糊精是beta;-环糊精的醚化衍生物[4,5]。HP-beta;-CD的结构式如图1所示，因为，每个beta;-CD分子中有七个D-吡喃葡萄糖残基，每个葡萄糖残基上有三个可被取代的羟基，所以，这样计算HP-beta;-CD的平均取代度为0-21。HP-beta;-CD平均取代度的不同，其各种性能参数也稍有不同。目前国际上使用HP-beta;-CD的平均取代度一般为4.0-6.0。 　　目前中国药典和欧洲药典中，用于测定 HP-beta;-CD平均取代度的方法有气相色谱法、容量法及核磁法[6,7]。目前国内采用核磁共振方法测定 HP-beta;-CD平均取代度还没有文献报道，本研究采用核磁共振氢谱（1H-NMR）方法，建立了一种快速、专属、简单，用于无对照品或者指示剂的 HP-beta;-CD平均取代度测定的分析方法。 　　2实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　AVANCE III 600 MHz 全数字化超导核磁共振谱仪（瑞士 Bruker公司）。D2O（（D，99.9%），美国 CIL）；三批羟丙基-beta;-环糊精（批号：130101、130102、130103；由石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司提供）。 　　2.2 实验方法 　　测定温度：25℃；环境湿度：15 RH%；观测频率：600.137 MHz；谱宽：4200Hz；90度脉冲宽度：10.06mu;s；脉冲延迟时间：1s；采样时间：3s；采样次数：64次；高斯增宽因子：0；线增宽因子：0.2。分别准确称量不同批次羟丙基-倍他-环糊精10mg置于5mm的核磁共振样品管中，加入0.6毫升D2O振荡溶解，制成待测试样溶液。在上述的实验条件下，调整仪器参数，调谐、控温、匀场、采样，得到1H-NMR谱。在进行相位和基线调整，以水峰为内标，标记为4.75ppm，分别对5.3-4.85 ppm（葡萄糖环上氢的化学位移）和1.2-1.0 ppm（羟丙基上甲基的化学位移）分别进行积分，将得到积分值进行平均取代度的计算[7]。 　　A1：羟丙基上甲基氢的积分面积；A2：葡萄糖环上氢的积分面积； 　　3结果与讨论 　　3. 11H-NMR 测定羟丙基-倍他-环糊精（HP-beta;-CD）平均取代度方法的建立 　　3.1.1溶剂及内标峰选定 　　固体样品须配成溶液测试，合适的溶剂粘度小，对样品溶解性能好，不与样品发生化学反应或者缔合，其谱峰不与样品峰发生重叠。因为羟丙基-倍他-环糊精的水溶解性好，所以采用水作为溶剂，羟丙基-倍他-环糊精的1H-NMR谱见图2。内标物质应该具有较高的纯度和准