高效液相色谱法测定大鼠血浆中防己诺林碱和粉防己碱研究.pdfVIP

t届中圈中西部地区色谱学术交流会 2006Jr-8月 高效液相色谱法测定大鼠血浆中 防己诺林碱和粉防己碱 田卫1’张海霞，地黄华宇，2李仁德2 1兰州大学化学化T学院，2兰州大学生命科学学院，兰州，730000 ■耍：建立了高效液相色谱(IlPLC)快速测定血浆中2种生物活性碱一一防己诺林碱和粉防己碱的方法．血浆经乙腈沉淀蛋白，稀释后直 防己诺林碱和扮防己碱在生物体内的药物代谢机理研究提供了筒便，更敛．准确的分离测定方法． 关健词：HPLC；防己科：血蒙 。 防己科千藤属植物全世界约60多种，我国有39种，分布于长江流域及其以南各省区，以云南 和广西种类最多ll】．本属植物富含有生物碱，有生物活性的达20余种，其中一些已应用于临床． 防己诺林碱和粉防己碱是含有双苄基异喹啉复杂结构的重要生物碱，具有广泛的生物活性，近 年来日益受到重视，并发表了大量有关药理研究的报道【2’3’4J．研究表明其具有抗心律失常、降血压、 抗矽肺、消炎、抗肿瘤以及等多种功能【5】．利用薄层层析．分光光度法和薄层层析．荧光法测定血浆中 生物碱的报道较多，陈春林等应用了高效薄层色谱法测定了粉防己碱血浆浓度[el；汪宝琪等用胶束 测定了人血浆中汉防己甲素(粉防己碱)嗍；熊惠瑜等建立离子对高效液相色谱法检测小鼠血浆中 粉防己碱浓度的方法唧；至今未见同时测定血浆中防己诺林碱和粉防己碱浓度的报道．本文建立了应 用高效液相色谱测定大鼠血浆中的防己诺林碱和粉防己碱浓度的方法． 1实验部分 1．1仪器 pHS·3B酸度计． 1．2试剂 乙腈，磷酸二氢钠，三乙胺，磷酸(均为分析纯)，防已诺林碱和粉防己碱标准品(中国生物制 品检定所)，防己中药(兰州市天水路康尔佳大药房)，高纯水(MILLlPORE) ．1．3色谱条件 CI 色谱柱：ODS8柱(Kromasil)，5岬，]50ram×4．6mm u 0．01mol／L，在磷酸二氢钠溶液中加入三乙胺后，用磷酸调pH=7，流动相用O．45 m膜过滤并经超 声脱气．流速：lmL／min．检测波长：282nm． 107 首届中国中西部地区色谱掌术交流会 2006年8月 1。4标准溶液的配制 ll 准确称取防己诺林碱和粉防己碱各Img左右，分别用乙腈溶解至LOOmL，经0．45m过滤后。 IJ 配制含两个标准品各为l g／mL浓度的混合溶液． 1．5样品处理¨训 室温放置20min，再次离心lOmin取上层有机溶剂层．有机溶剂层稀释25倍，经0．45um过滤后进 样． 。 ， 2结果与讨论 2．I流动相的筛选和优化 由于两个生物碱呈碱性(图1是两个生物碱的结构)，与硅胶残余的硅羟基反应导致峰型拖尾。 故通常在流动相中添加三乙胺．但是三乙胺的量不宜过大，否则流动相的pH值偏高，损害色谱柱。 二乙胺)改善峰形。宋旭峰等选用甲醇叫．3 物粉防己中的粉防己碱和防己诺林碱时114J，经C18色谱柱分离，两生物碱均在5分钟之后得到分 离．但是在色谱中流动相最好使用缓冲溶液，保证分析条件的重现性并保证柱子的稳定性。我们经反 分离测定血浆中的生物碱效果较好，在保护色谱柱的同时也缩短了分析时间． 、CH3