离子色谱脉冲安培检测法测定酵母细胞壁中β葡聚糖和甘露寡糖研究.pdfVIP

◎ 第十二届全国离子色谱学术报告会论文集福建厦门2008．11．5-8458 离子色谱．脉冲安培检测法测定酵母细胞壁中p葡聚糖和甘露寡糖 李仁勇，梁立娜，蔡亚岐，牟世芬 中科院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京100085 caiyaqi@rcees．ac．cn 摘要：本文中建立了一套高效阴离子交换色谱分离一积分脉冲安培检测法测定酵母细胞壁中的B．葡聚糖和甘 露寡糖的方法。以NaOH为淋洗液，在CarboPacPAl0阴离子交换柱上可以较好分离甘露糖醇、阿拉伯糖、 半乳糖、果糖、葡萄糖和甘露糖。样品中的低聚糖在优化的水解条件下得到葡萄糖和甘露糖，再通过测定单 糖而得到B．葡聚糖和甘露寡糖的含量。这两种低聚糖的检出限分别为0．4和0．5 lag·L-I，且均具有较宽的线性 范围，三个样品测定的相对标准偏差在0．29～1．03％之间。该方法检测糖简便快捷、分离效果好、无需衍生、 灵敏度高，适用于多种复杂样品中的低聚糖分析。 关键词：离子色谱法；积分脉冲安培检测；酵母细胞壁；B．葡聚糖；甘露寡糖 酵母细胞壁作为一种很有发展前景的新型添加剂，因其具有抗生素和益生素双重功效而 越来越受到学术界和养殖业的重视。其中葡聚糖和甘露寡糖是其主要活性成分，具有刺激细 胞免疫和体液免疫、抑菌等作用【IJ。目前常见的低聚糖直接测定方法主要有比色法和酶法，比 色法没有选择性，酶法则专一性太强，耗时长且操作繁琐。而另一种思路则是将低聚糖通过 水解得到单糖后检测，单糖测定方法主要有气相色谱法【2】、毛细管电泳法【3】、高效液相色谱 法【4】和离子色谱法【5击】。气相色谱法和毛细管电泳法都必须经过衍生后检测，而液相色谱法虽 无需衍生但灵敏度很低。离子色谱．积分脉冲安培检测糖相对操作简便，无需衍生，且灵敏度 极高，受到科研单位和检测机构越来越多的重视。本文中以硫酸水解酵母细胞壁样品得到相 应单糖，经阴离子色谱柱分离和积分脉冲安培法检测，最终得到样品中p．葡聚糖和甘露寡糖的 含量。 1实验试验部分 1．1仪器和试剂 6．80色谱工作站，AS自动进 电极，pH／Ag／AgCl复合参比电极，钛金属对电极，Chromeleon 样器； Milli．Q AdvantageAIO超纯水机(Millipore，美国)； DionexOnGuardIIRP固相萃取柱；0．22pan微孔尼龙膜； 甘露糖醇、阿拉伯糖、半乳糖、果糖、葡萄糖、甘露糖的标准储备液1000 mg／L。 1．2测定条件 分析柱：CarboPacPAlO，250x4rain；保护柱：CarboPaePAl0，50x4lnnl： ED 3000脉冲安培检测，Au工作电极电极，Ag／AgCl参比电极模式，糖标准四电位波形 (carbohydrates(standardquad))。 min，15mM min，200mM min，15mM 淋洗液条件：0．20 NaOH；20．1．25 NaoH；25．1．30 NaOH； 流速：1．00 mL／min；进样方式：自动进样；进样体积：25此：柱温：30℃。 2结果与讨论 2．1方法的标准曲线和方法检出限 ◎ 第十二届全国离子色谱学术报告会论文集福建厦门2008．11．6-8459 以峰面积为研究对象，葡萄糖和甘露糖在较宽浓度范围内都具有很好的线性，线性相关 系数分别为0．9999和0．9998。根据3倍信噪比可分别计算出葡萄糖和甘露糖的检出限。也即 B．葡聚糖和甘露寡糖的检出限分别为0．4和0．5Pg·L_1，相比较于其它测定方法，灵敏度得到明 显的提高。 2．2样品前处理方法的条件优化及重现性 酸水解温度、硫酸的加入量以及样品水解的时间这三个条件因素都直接关系到水解的效 果，实验研究了温度在80．150℃区间内变化时对样品水解效率的影响，结果表明温度对水解 效率的