膜的分离法.PDFVIP

教 师 授 课 方 案 年 月 日 课 题 第二章第六节凝胶层析 班 级 课 时 2 课 型 综合课 1.知道排阻极限、得水率的定义 教学目标 2.熟悉凝胶层析的操作方法 科学要有严谨的作风和态度，实事求是。 德育渗透 教学方法 讲授法、讨论法 新知识 凝胶剂 新技术或 参阅资料 凝胶层析 gel chromatography 排阻极限 exclusion limit 双语教学 分级分离范围 fractionation range 得水率water regains 床体积 bed volume 葡聚糖凝胶 dextran gel 聚丙烯酰胺凝胶polyacrylamide gel 琼脂糖凝胶 agarose gel 指定参考书目 陈电容 主编《生物制药工艺学》 人民卫生出版社 第二章第六节 凝胶层析 [导入新课] 体积排阻色谱是将分子按照其大小进行分离的色谱技术。根据固定相和使用环境的不同 主要有两种类型：凝胶过滤色谱和凝胶渗透色谱。凝胶过滤色谱在生物分离中应用较多。 [教学内容] 凝胶层析（gel chromatography ）是指混合物随流动相经装有凝胶作为固定相的层析柱 时，混合物因分子大小不同而被分离的技术。 一、基本原理 分离原理主要是基于一种可逆的分子筛作用。当含有各种物质的溶液流经凝胶柱时，同 时进行着垂直向下移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒 的微孔，只能分布于凝胶颗粒间隙中，向下移动的速度较快；小分子物质除了可以在凝胶 颗粒间隙中扩散外，还可进入凝胶颗粒的微孔之中，即进入凝胶相内。因此在向下移动的过 程中要等待它们从凝胶颗粒中扩散到颗粒间隙后才能进入另一凝胶颗粒，如此不断的进入 和扩散，使小分子物质下移的速度落后于大分子物质，而达到分离效果。 二、凝胶层析的几个概念 1．排阻极限（exclusion limit ）：是指不能扩散进入凝胶颗粒内部的最小溶质分子的分 子量，即能有效地分离一定形状样品物质分子分子量的最大极限。一种物质分子的分子量大 于排阻极限就不能进入网孔内部，就不能有效分离。 2 ．分级分离范围（fractionation range ）：是指某种凝胶允许溶质分子量在多大范围内 能得到线性分离。 3 ．得水率（water regains ）：是指 1 克干凝胶吸收水分的克数。凝胶层析所用凝胶多以 干燥方式保存，使用前需吸水膨胀。 4 ．床体积（bed volume ）：为 1 克干胶吸水膨胀后的体积。 三、常用的几种凝胶 1．葡聚糖凝胶（dextran gel ） 最常用的凝胶。基本骨架是葡聚糖，是一种以右旋葡萄糖为残基的多糖。其孔径可通过调 节交联剂和葡萄糖的配比以及反应的条件来控制，交联度越大，孔径越小。葡聚糖凝胶是一 种化学性质比较稳定的物质，不溶于水、弱酸、碱和盐溶液，在一般的有机溶剂溶液中也不 溶解。本身具有很弱的酸性。低温时，在0.1mol/L 盐酸中保持1～2h 不改变性质；室温时， 在 0.01mol/L 盐酸中放置半年也不改变；在0.25mol/L 氢氧化钠中，60℃两个月不改变；可 在 120℃加热30min 灭菌而不破坏，但高于 120℃即变黄。 状保存易长霉。若常时间不用， 需加防腐剂。 2 ．聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel ） 是一种全化学合成的人工凝胶。由单体丙烯酰胺合成线状多聚物，在与交联剂次甲基双 丙烯酰胺通过自由基引发聚合反应形成聚丙烯