A特殊毒性实验.pptx

;第一节 化学毒物的致突变作用;教学内容;教学目的 了解遗传学基础，致突变实验中存在问题； 熟悉DNA损伤的修复，机体对致突变作用影响； 掌握致突变类型、机制和后果，常用致突变实验的原理;§1 概述（基本概念）;6;2、基因;3、染色质和染色体;11;12;4、细胞周期与细胞分裂 细胞从DNA复制起，经过分裂直到把DNA均等地分配到两个新的子细胞的全过程。;;15;16;5、体细胞与生殖细胞 ;6、遗传与变异; 自发变异 DNA的复制错误 自发的化学变化;7、致突变作用 外源化学物及其它环境因素能引起细胞核中的遗传物质发生变化，这种改变随同细胞分裂过程而传递的过程称为致突变作用;§2 致突变作用的类型;突变;碱基置换;24;移码;大段损伤;倒位（逆位）：染色体在某一片段的位置颠倒了180° ;易位（转座）：染色体的某一片段移接到另一非同源染色体上;缺失：染色体中某一片段的缺失 ;重复：染色体中增加了某一片段 ;卵圆眼;染色体数目异常;§3 致突变的机理;（一）以DNA为靶的直接诱变;（一）以DNA为靶的直接诱变;（一）以DNA为靶的直接诱变;37;胸腺嘧啶;（一）以DNA为靶的直接诱变;次黄嘌呤;41;（一）以DNA为靶的直接诱变;（一）以DNA为靶的直接诱变;（二）不以DNA为靶的间接诱变;1、纺锤体抑制;2、对DNA合成和修复有关的酶系统作用;复制;切除修复;§4 突变的后果;对机体无影响，如同义突变； 导致对健康无影响的正常人体生化组成的遗传学变异； 导致遗传易感性的改变； 导致遗传性疾病； 致死性突变，造成配子死亡、死胎及自发流产等。;§5 化学毒物致突变作用的研究方法;基因突变和染色体畸变的检测可直接反映化学毒物的致突变性，是评价化学毒物致突变性唯一可靠的方法。还有许多试验所观察到的现象并不反映基因突变、染色体畸变和染色体分离异常，而仅反映致突变过程中发生的其他事件。因此将试验观察到的现象所反映的各种事件称为遗传学终点。 遗传学终点分为：基因突变、染色体畸变、DNA损伤等其他遗传损伤的检测;一、主要致突变实验;染色体畸变;1、细菌回复突变试验;（1）什么是细菌回复突变试验？ 以营养缺陷型的突变体菌株为指示生物检测基因突变的体外试验。 常用的菌株有组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌和色氨酸营养缺陷型的大肠杆菌。;（2）鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验原理;代谢活化系统一般是S9混合液。S9即将一组雄性大鼠进行腹腔注射芳香族化合物如多氯联苯油溶液等诱导大鼠肝脏酶系的活性，4d后杀鼠取肝脏，匀浆，经9000g离心得到的上清液。再加入一些辅助因子，如辅酶Ⅱ(NADP)、葡萄糖-6-磷酸，K+／Mg++及缓冲液等组成S9混合液(S9mix)，构成NADPH再生系统。 ;（3）Ames法原理的依据 化学物质引起的诱变往往不是直接的，它要经过生物的消化、吸收，特别是高等生物肝脏中的有关酶的作用后再起作用，也许它本来是可以起到诱变作用的，但经肝脏中酶作用后失去了诱变能力，也许正好相反，相来它不具有诱变的能力，但经肝脏酶作用后，反而获得了诱变的能力，因此经过肝脏中酶的作用才能较真实地反映在动物活体中某种化学物的实际诱变能力。 诱变剂仅改变突变的频率，但不改变突变的方向，那么同样诱变剂也能导致回复突变，如果用正突变的话是多方向的，所以必需采用反方向的选择方向才行，而用回突变只需用基本的培养基进行筛选即可，步骤就要简单的多。;（4）测试菌株 TA 98、TA 97（检测移码突变） 、 TA100（检测碱基置换突变）及TA102（对醛、过氧化物及DNA交联剂较敏感）等。 测试菌株含有组氨酸基因突变（hisˉ），脂多糖屏障丢失（rfa），紫外线切除修复系统缺失，抗药性标记R。;（5）Ames检测方法;优点:方法灵敏，检出率高，经试验有90％的化学致癌物经都可获得阳性结果；加之方法比较简便、易行，不需特殊器材，容易推广。 缺点:微生物的DNA修复系统比哺乳动物简单，基因不如哺乳动物多，不能完全代表哺乳动物的实际情况。 尽管如此，由于存在着上述的优势，故目前在致突变试验中占重要位置，为首选的试验方法。;2、哺乳动物细胞基因突变试验;3、果蝇伴性隐性致死试验;4、转基因动物致突变试验;5、染色体畸变分析试验;67;6、微核试验(micronucleus assay);;;;;;7、程序外DNA合成试验;8、姐妹染色单体交换试验;76;二、应注意的一些问题;2、阳性对照和阴性对照的设立 阴性对照目的是获得实验的基础数据 阳性对照目的是证明实验方法的可靠；实验者在本实验条件下完成技术和鉴定致突变物的能力；证实经一段时间后，本实验的重复性。;3、致突变实验结果判定 首先应检查试验的质量控制情况：试验程序、操作的正确性、pH