利用表面等离子体谐振传感器分析生物分子间的相互作用研究.pdfVIP

摘要 摘要 表面等离子体谐振 (SPR)生物传感器广泛用于生物亲和反应的检测和动力 学分析中。它的优点是能实时检测反应，样品无须标记，以及能对反应进行动力 学分析等。口fill的SPR生物传感器主要是基于角度调制法而设计，基于定点光强 检测法的SPR传感器很少，相关的应用研究更少。在检测对象上，目前的SPR生 物传感器几乎无一例外的用于生物亲和反应的检测，没有成熟的针对酶促反应的 检测分析方法。本论文介绍了基于自制的角度调制型SPR生物传感器SPR-2000 在以下几个方面的研究。 理论分析和证明了定点光强检测法用于生物亲和反应的动力学分析的可行 性最后设计实验初步验证之。理论分析结果证明，当选择合适的检测点并设定合 适的光强变化范围，定点光强与谐振角和溶液折射率的线性关系，并进一步推导 出定点光强检测法用于生物亲和反应的动力学分析的公式。最后设计实验分析定 点光强与谐振角的线性关系，分析结果显示线性关系在99.9%以上。 经过检测方法学上的改进，使采用角度调制的SPR-2000其兼容定点光强检测 法，并设计实验分析了两者的互补性。结果显示定点光强检测法得到的反应信号 更稳定，因而更适合做动力学分析;角度调制法的检测信号不够稳定，但是具有 更高的灵敏度，因而更适合检测低亲和力的亲和反应。 设计SPR传感器检测和分析酶促反应的模型，并进行理论分析和实验验证。 理论上设计了三个模型:检测反应引起溶液本体折射率变化:检测酶对芯片表面 的底物的催化作用:捕获反应产物。并对前两个模型用胶原酶I/胶原I反应体 系进行实验验证，结果显示跟理论分析相符。 另外，基于SPR-2000,采用角度调制法检测了金黄色葡萄球菌肠毒素B (SEB)。通过在芯片表面固定SEB单克隆抗体，来捕获溶液中的SEB，本论文 检测到的灵敏度是1ug/ml,离实用的lng/ml还有一定距离。 关键词:表面等离子谐振 (SPR)传感器、定点光强检测法、酶促反应、动力学 分析 利用表面等离子体谐振传感麟分析生物分子间的相互作用 Analysisofbiomolecularinteractionswithasurfaceplasmon resonancebiosensor biology) XiangSihai(Biochemistryandmolecular 但irectedbyProf.CuiDafuandProf.Tin Abstract Surfaceplasmonresonance(SPR)biosensorshavenowbeenwidelyusedinthe analysisofbiomolecularinteractions,becausetheypermittheanalysisof biomolecularinteractionsinrealtimewithouttheneedtolabelthereactants.Whatis more,asaquantitativetool,SPRbiosensorscanbeusedtodeterminethekineticand affniityconstantsformolecularinteractions.AtpresentmostcommercialSPR biosensorsusetheangularinterrogationapproach,andthosebasedonthe measurementoflightintensityatafixedangle(MLIFA),andcorresponding applicationstudyarescarce.Astothedetectedbiomolecularinteractions,almostall theSPRbiosensorsarefocusedinthetypicalaffinityinteractionsincluding antigen-antibody