麻醉用苯巴比妥钠对人大肠癌HCT-8细胞的影响细胞学研究.docVIP

精品论文 参考文献 麻醉用苯巴比妥钠对人大肠癌HCT-8细胞的影响细胞学研究 宋志永 李泉 　　[摘 要]目的　了解苯巴比妥钠对体外培养人直肠癌HCT-8细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法　体外培养人直肠癌HCT-8细胞，实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度苯巴比妥钠（0.01,0.1,1,10,100mu;mol?L-1），对照组RPMI-1640培养液中不加苯巴比妥钠，分别孵育48小时后，采用MTT比色法检测直肠癌细胞增殖活性，采用流式细胞技术检测苯巴比妥钠对直肠癌细胞周期的影响，用Hoechst33258染色方法分析鉴定苯巴比妥钠对直肠癌细胞凋亡的影响。结果 苯巴比妥钠浓度ge;1mu;mol?L-1时，细胞增殖活性较对照组显著下降（P＜0.05）；随着苯巴比妥钠浓度增加，G1期细胞比例逐渐增高，S期细胞比例逐渐降低。用Hoechst33258方法染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分直肠癌细胞发生凋亡，当苯巴比妥钠浓度ge;10mu;mol?L-1时，荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞占总细胞数的比例较对照组显著增加（P＜0.05）。结论　苯巴比妥钠在临床常用剂量范围内对直肠癌细胞株直肠癌细胞增殖和凋亡无明显影响，当浓度ge;1mu;mol?L-1时可以抑制人直肠癌细胞株直肠癌细胞增殖，主要将细胞周期阻滞在G1期，当苯巴比妥钠浓度ge;10mu;mol?L-1时可引起直肠癌细胞凋亡。 　　[关键词]苯巴比妥钠 细胞增殖 细胞凋亡 　　DOI:10.3760/cma.j.issn.1672-7088.2014.27.11 　　作者单位： 262700 山东寿光，寿光市中医医院 　　[作者简介] 宋志永（1975-），男，现任寿光市中医医院主治医师，研究方向：临床麻醉。 　　李泉（1975-），男，现任寿光市中医医院主治医师，研究方向：消化内科。　 　　临床麻醉用药中许多因素可能对肿瘤患者治疗过程中的肿瘤细胞产生影响，从而增加肿瘤患者术后转移与复发的几率[1]。麻醉类药物是肿瘤患者手术镇痛必不可少的药物之一，这类药物同样可能通过各种机制而影响肿瘤细胞的生长、增殖及转移。但迄今为止，麻醉药物对肿瘤细胞生物学行为的影响尚无一致的结论：如 Shavit等[2]研究发现，阿片类药物能通过降低机体的细胞免疫反应从而促进肿瘤细胞生长，而更多的学者认为阿片类药物能抑制肿瘤细胞增殖[3]。苯巴比妥钠对中枢神经系统有广泛抑制作用，随用量增加而产生镇静、催眠和抗惊厥效应，大剂量时产生麻醉作用，作用机制现认为主要与阻断脑干网状结构上行激活系统有关。本品还具有抗癫痫效应，其机制在于抑制中枢神经系统单突触和多突触传递，还可能与其增强中枢抑制性递质丁氨酸的功能有关。由于镇痛维持时间长而广泛应用于各类手术术中，但苯巴比妥钠对肿瘤细胞生物学行为的影响尚未见报道。本研究主要观察不同浓度苯巴比妥钠对体外培养直肠癌细胞株直肠癌细胞增殖活性、细胞周期及细胞凋亡的影响，以了解苯巴比妥钠用于恶性肿瘤患者围术期镇痛及早中期癌痛手术治疗的安全性。 　　1. 材料与方法 　　1.1 材料　RPMI-1640培养基（GiBCo公司），新生小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），PBS（北京天根生物有限公司），胰蛋白酶（中南大学细胞中心），MTT（Sigma公司），DMSO（Sigma公司），Hoechst33258（Sigma公司），PI（Sigma公司），双蒸水（中南大学湘雅医院神经内科实验室），无水乙醇（天津市大茂化学试剂厂）苯巴比妥钠（宜昌人福药业有限责任公司，080903），倒置相差显微镜（德国Zeiss Axiovert 200），CO2培养箱（THERMO），酶标仪（THERMO）流式细胞仪（美国Coulter公司）人直肠细胞(中南大学肿瘤研究所实验室提供）。 　　1.2 方法 　　1.2.1细胞培养　人直肠癌细胞培养于含10%小牛血清、青霉素（100U?mL-1)、链霉素(100U?mL-1)双抗的RPMI-1640培养基中，在37℃、体积分数为5％CO2、相对湿度90%的培养箱中培养，定期观察细胞生长情况。每2～3天用0.25%的胰酶消化，进行传代培养。实验所用细胞均处于对数生长期。 　　1.2.2 MTT比色法检测细胞增殖活性　细胞以5times;104个?mL-1的密度接种于96孔培养板中。实验组和阴性对照组每孔加细胞悬液100mu;L，空白孔不加细胞，置于CO2培养箱中培养过夜，待细胞已完全贴壁后，小心吸去96孔板内上清液。实验组每孔加入含不同浓度苯巴比妥钠（0.01,0.1,1,10,100mu;mol?L-1）的RPMI-1640培养基200mu;L，阴性对照组与空白调零组只加培养基200mu;L。每组