医学生物学精品教学（河南科技大学）第二章细胞生物学研究方法.pptVIP

第二章 细胞生物学研究的方法 本章提示：细胞微小，结构复杂，生理活动频繁，要了解他们的本质，并研究其在自然界规律，就要有一定的方法和技术。而这些是需要在实践过程中学习和加强的。所以我们在此只对细胞生物学研究的方法只作一般了解。 节一、细胞观察方法 节二、细胞组分分析方法 节三、细胞培养方法 一、显微结构的观察 显微结构的观察以观察的设备和方法有关，具体的有多种。 （一）普通光学显微镜 由三部分组成：照明、光学、机械。 显微镜的清晰程度与放大倍数和分辨率相关。 （二） 相差显微镜 是利用光线衍射作用，不用染色，观察物体的阴暗程度差异，便于活细胞观察。 （三）微分干涉显微镜 光源是偏振光，更便于观察活细胞。 （四）暗视野显微镜 也用于活细胞观察。 （五）激光扫描共聚焦显微镜 光源是激光，观察为点，线，面，聚集成像 是三维结构。 荧光显微镜技术的应用： 荧光染料染色 多荧光抗体探针标定 荧光显微镜镜检 （六）荧光显微镜 利用特殊光源和染色方法，观察细胞中的荧光物质的存在。 二、超微结构显微镜 即电子显微镜，光源是电子光束，成像是屏幕成像。原理见图主要有二： （一）透射电子显微镜 （二）扫描电子显微镜 两种制片一样： 1超薄切片技术 2负染色技术 3冷冻断裂蚀刻复型技术 4冷冻蚀刻技术 成像方法： 一是直接， 一是扫描聚集。 第二节细胞组分的分析方法 一、离心 一般1800以下为低速；18000-35000之间为高速；100000以上为超速。 主要有二： 密度梯度离心，沉淀分离。 差速离心，分离提纯。（见图） 二、免疫细胞化学法 利用免疫原理用抗体探针标记，再在显微镜下观察，多用于定位、定性分析。 三、放射自显影 利用同位素电离辐射，显影成像，对物质定性，定量。 四、流式细胞术 应用流式细胞仪对细胞进行快速定量分析与分选的技术。 第三节细胞培养 在体外进行，便于观察，研究，分选，分析等。 一、培养步骤 1准备 2取材 3培养 二、原代培养和继代培养 原代培养：从个体取细胞培养，首次传代之前的过程。 继代培养:原代培养基础上，分离继续培养传代过程。 三、单层培养和悬浮培养 单层培养:自然培养，细胞单层贴壁。（数量较少） 悬浮培养:细胞悬浮培养液中，技术复杂。（数量较多） 在我们今后的实验课内容里将会详细了解此内容。 * * * * * 电子显微镜和光学显微镜的工作原理 * * *