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柔嫩艾美耳球虫多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析.doc
柔嫩艾美耳球虫多肽:N-乙酰氨基半乳 糖转移酶2的基因表达及转录动态分析
刘晓丽糞振兴马雪婷曲自刚韩政岚刘保红袁 如意杨孝朴蔡建平 甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医 研宄所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃
省动物寄生虫病重点实验室江苏省动物重要疫病与 人兽共患病防控协同创新中心
蛋白质翻译后0-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌，多肽:N-乙酰 氨基半乳糖转移酶 2 (po 1 y pep tide: N-ace t y 1 gal ac t osam i ny 1 transferase 2, ppGalNAc-T2)是0-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有 0-糖基化反应途径。为研宄柔嫩艾美耳球虫(Eimcria tcnclla)蛋G质翻译后
糖基化修饰及其关键酶的药靶效用，对Et ppGalNAc-T2基因进行了克隆，并检 测其在E. tenella不同发育阶段的表达动态。根据EuPathDB中所预测Et ppGalNAc-T2基因序列设计引物，以RT-PCR方法扩增获得Et ppGalNAc_T2的ORF, 插入酶切位点A连接到原核表达载体pGEX-6p-l进行诱导表达。提取E. tenella 广东株未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5 个发育阶段的总RNA，以qRT-PCR法检测Et ppGalNAc_T2转录水平的动态变化。 结果表明，Et ppGalNAc-T2的全长ORF为1 983bp,编码660个氨基酸，在 E.coli Transetta (DE3)可溶性表达。qRT-PCR 结果显示，Et ppGalNAc-T2 转 录水平随发育阶段不同而有显著差异，子孢子阶段表达水平最高、而在孢子化卵 囊则几近不能检出。结果为进一步研宄EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础。
关键词:
柔嫩艾美耳球虫;ppGa]NAc-T2;基因克隆;表达差异;qRT-PCR;
刘晓丽(1988-),女，甘肃会宁人，生，主要从事球虫病研究, E-mail:1iuxlil525@163. com
蔡建平，研究员，博导，主耍从事球虫痫和猪禽肠道健康研 究；E-mail:cai jianping@caas. cn;
杨孝朴，教授，硕导，主要从事动物生化教学和研究， E-mail:yangxpu@gsau. edu. cn
:2017-05-22
基金：国家自然科学基金
Expression Profiling of
Polypeptide:N-acetylgalactosaminyl transferase T2 during Eimeria tenella Developmental Cycle
LIU Xiao-li GONG Zhen-xing MA Xue-ting QU Zi-gang HAN Zheng-Ian LIU Bao-hong YUAN Ru-yi YANG Xiao-pu CAI Jian-ping
College of Veterinary Medicine， Gansu Agricultural University; State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology/Key Laboratory
of Veterinary Parasitology of Gansu
Province/Lanzhou Veterinary Research Institute,
Chinese Academy of Agricultural Sciences;
Abstract：
0-1 inked glycosylation is a form of protein posttranslational modifications that occurs in the Golgi apparatus of eukaryotes, and archaea as well as
bacteria. Polypeptide:N-acetylgalactosaminyltransferase 2 (ppGalNAc-T2, EC 2. 4. 1. 41) is the first key enzyme in the pathway ofO-glycan biosynthesis. Whole genome sequencing of Eimeria spp has ever revealed that these protozoa possess the pathways for 0-glycan synthesis and
0-1 inked glycosylation
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