酪蛋白等电点实验.pptVIP

实验原理 蛋白质是两性电解质，分子中含有的氨基和羧基均可电离。当溶液中的pH值大于等电点时，其氨基电离被抑制而羧基电离，蛋白质成带负电荷的阴离子。反之，当溶液pH小于蛋白质等电点时，其羧基电离受到抑制而氨基接受质子，蛋白质成为带正电荷的阳离子。当溶液pH值达到某一值时，蛋白质分子成为所带的正、负电荷数相等的兼性离子，此时溶液的pH值就是该蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质的粘度和溶解度均大幅降低。 本实验观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解状态以测定其等电点。以醋酸和酪蛋白溶液中的醋酸钠构成各种不同pH值的缓冲液，在某种溶液中，酪蛋白溶解度最小时，该溶液的pH值就是酪蛋白的等电点。 （三）实验材料 器材：200和1000μL可调移液枪、试管、试管架、刻度吸管等 试剂：1.00mol/L、0.01mol/L和0.100mol/L乙酸 5g/L的酪蛋白-醋酸钠溶液 （四）操作步骤 混匀后，试管架上静止20min，观察各试管的混浊情况或沉淀情况，并记录。 1.60 - （五）注意事项 （1）取样须准确 （2）加酪蛋白-乙酸溶液时，必须加一管，摇匀一管 （六）思考题 （1）为什么上清最清、沉淀最多管的pH值就是酪蛋白的等电点？ （2）是否还有其它测定蛋白质等电点的方法？简述其原理。 * * 病原菌多基因调控机制研究 生物化学实验基本技能 内容提要 一、生物化学实验要求与实验室规则 二、生物化学实验的基本操作 三、分光光度法 一、生物化学实验要求与实验室规则 1、遵守课堂纪律、维护课堂秩序，不迟到、不早退，严禁打闹，进入实验室必须穿实验服。 2、原则上不允许请假。如是病假，须医院开具证明，且要辅导员签字；如是事假，列出事假理由，并有辅导员签字。由于请假漏做的实验，需要补做，否则零分。无故旷课，则零分，且实验课须重修。 3、实验前要认真预习，掌握实验的目的、 原理，熟悉操作步骤。听从老师的安排，不违规操作，注意自身安全。实验完成后要及时书写实验报告（实验名称、日期、目的、原理、步骤、结果、结果分析、思考题，文字简练、准确、认真，实验报告下一次实验课开始前上交，统一用实验报告纸）。 4、实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应及时复原。实验完成后，仪器洗净并放回原处，将实验产生的垃圾打扫干净，方可离开实验室。 5、注意节约药品、试剂；洗涤和使用仪器时要小心仔细，防止损伤仪器及造成自身伤害；发现仪器故障应立即报告老师，不可擅自动手检修。 6、严禁在实验室吸烟、喝水、吃东西。 7、每次实验课结束，由班长负责安排值日生，负责打扫实验室卫生。 二、生物化学实验的基本操作 （一）常用玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿洁净与否，是实验结果是否准确的重要环节。洁净依据：内壁应十分明亮光滑，无水珠附在玻壁上。 1、新购玻璃器材的清洗：一般用1~2%的稀盐酸浸泡1~2h，有条件的可以用浓硫酸浸泡30min，再用水冲洗，以去除附着的油污、灰尘和金属离子等。 2、用过的玻璃器材清洗： （1）一般器皿（如烧杯、试管等） 用肥皂水和毛刷刷洗，再用清水冲洗干净。 （2）定容分析器皿（如吸量管、量筒等） 比较干净的，直接去离子水冲洗即可；否则用铬酸（酸性和氧化性）洗液浸泡，自来水和蒸馏水冲洗。 （3）粘附有血浆的刻度吸管清洗 45%尿素浸泡或1%氨水浸泡后，再稀盐酸浸泡，对于顽固污垢可再次采用重铬酸钾溶液浸泡。 （二）常用器材的使用方法 1、吸量管种类和使用 （1）种类：移液管、奥氏吸管和刻度吸管 移液管 奥氏吸管 刻度吸管 （2）刻度吸管的使用 使用前：①?吸管无破损且干净；②选取合适的量程；③观察有无“吹”字：若有，说明刻度到尖端，放液后需将尖端的溶液吹出，否则不吹。 握法：拇指和中指夹拄吸管，食指游离。? 取液：①垂直入液?，且入液深度适中；② ?吸耳球吸取液体，并使液高高于待量刻度2-3cm； ③ ?食指按紧吸管上端，并提离液面、观察液内有无气泡。 放液至刻度：刻度吸管垂直，右眼与刻度线平行，轻轻松开食指（转动刻度吸管），使液面缓慢降低，直至最低点与刻度线相切。? 放液至容器：刻度吸管垂直，容器倾斜45℃，使溶液自然流入容器，注意吹与不吹。 注意：一根吸管只吸取一种试剂；严禁用嘴吸。 2、自动移液器的使用 优点：使用方便，取、加样速度快，计量准确，不易破损，可以吸取多种液体（只需要换枪嘴即可） 移液器使用方法和注意事项 （1）设定移液体积：?从大量程调节至小量程为正常调节方法；从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。 ?（2）装配移液枪头?：将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。? ?（3）吸液