高产β-葡萄糖苷酶酿酒酵母的筛选及其特性研究.pptVIP

高产β-葡萄糖苷酶酿酒酵母的筛选及其特性研究 汇报人：丁吉星 2011.5.26 1、引言 2、实验材料和方法 3、实验结果与分析 4、结论 1、引言 酵母菌是葡萄酒酿造中重要的微生物，从葡萄品种原产地的环境中可以筛选出充分展现该地域特色的酵母，并酿出风格独特、具有品种典型性的葡萄酒。 优质葡萄酒需要具有产区特征、能够体现葡萄酒特色和风格的优良酵母菌株，因为酵母所产β-葡萄糖苷酶可以分解香气前体物质，增加葡萄酒香气的复杂性。 然而在目前，我国在葡萄酒酵母的研究和利用方面还处于起步阶段。因此，筛选具有我国产地特色的高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株对我国葡萄酒的生产具有重要的意义。 2、实验材料和方法 2.1实验材料 2.1.1菌株 新疆鄯善、河北昌黎、河北沙城、山东烟台、宁夏贺兰山、吉林通化、甘肃银川7个地区的酿酒酵母作为出发菌株， VL1作为工业对照菌株。 2.1.2培养基 YPDL 、YEPD、筛选培养基、发酵培养基 2.1.3主要试剂 对-硝基苯基-β-葡萄糖苷酶（p-NPG）、对硝基苯酚（p-NP）、葡萄糖、酵母浸粉、蛋白胨、琼脂、柠檬酸、乙醇、酒石酸、苹果酸、醋酸、硫酸钾、硫酸镁、考马斯亮兰、牛血清蛋白、碳酸钠、亚硫酸、无水乙醇、磷酸氢二钠、氯化钾、氯化钠、氯化钙、氯化亚铁、硫酸镁、硫酸锰、EDTA等 2.1.4 主要仪器 UV-1700紫外分光光度计、pHS-3C型精密pH计、冷藏箱、MJ-250B型霉菌培养箱、101－2A型电热鼓风干燥箱、电热恒温水浴箱、 SS325高速蒸汽灭菌锅、RC5C高速冷冻离心机 2、实验材料和方法 2.2实验方法 2.2.1出发菌株的选择（实验材料中的菌株） 2.2.2 高产β-葡萄糖苷酶酿酒酵母菌株的初步筛选 碳酸钠显色反应初选，p-NPG法测酶活性复选 2.2.3 酵母产β-葡萄糖苷酶的条件的优化 pH值、温度、酒精度、葡萄糖、培养时间 2.2.4影响β-葡萄糖苷酶活性的因素 温度、pH值、金属离子、胞内酶和胞外酶 2.2.5 初筛菌株的发酵特性研究 发酵力、耐低温、耐SO2、耐酒精 2、实验材料和方法 2.3 数据统计分析 每个处理进行三次重复，取其平均值进行分析，实验数据用DPS数据分析和进行方差分析 3、结果与分析 3.1高产β-葡萄糖苷酶酵母的筛选 对实验所用120株酵母进行初步筛选，挑选出32株高产酵母，进入下一轮进行定量分析（酵母产的β-葡萄糖苷酶）筛选，最终筛选出NE-8和NX-9。 3、结果与分析 3.2 影响酵母产β-葡萄糖苷酶的条件 3.2.1 pH值对酵母产酶的影响 NE-8酵母所产酶活性最大时最适pH=5.0，而VL1和NX-9最适pH值是4.5。 3、结果与分析 3.2 影响酵母产β-葡萄糖苷酶的条件 3.2.2 温度对酵母产酶的影响 NE-8产β-葡萄糖苷酶的最适温度是40℃，VL1和NX-9为30℃，相比NE-8，更适用于葡萄酒工业生产的温度。 3、结果与分析 3.2 影响酵母产β-葡萄糖苷酶的条件 3.2.3 酒精度对产β-糖苷酶的抑制作用 对于VL1和NX-9在酒精度超过8%时酶活性明显降低，降低至30%，在酒精度为20%时，酶活性几乎为零。但是对于酵母NE-8，随着酒精度的增加酶活性反而上升。 3、结果与分析 3.2 影响酵母产β-葡萄糖苷酶的条件 3.2.4 葡萄糖对酵母产酶的抑制作用 对于VL1和NX-9高浓度葡萄糖影响产酶，酶活性下降。对于NE-8在葡萄糖浓度为15%时，酶活性没有被抑制反而明显上升。 3、结果与分析 3.2 影响酵母产β-葡萄糖苷酶的条件 3.2.5 培养时间对酵母产酶的影响 在一定培养时间内，菌体的生长与时间成正比，酶活性力随时间的增加而增大，NE-8产酶最适时间为32h，NX-9产酶最适时间为48h。 3、结果与分析 3.3影响β-葡萄糖苷酶活性的因素 3.3.1 温度对酶活性的影响 NE-8当在30-45℃条件下，酶活性随温度的升高而增加，在45℃酶活达到峰值，说明45℃是该酶最适作用温度。NX-9 所产β-葡萄糖苷酶酶活性最适作