46xy女性性逆转患者的sf1基因分析研究 word格式.docxVIP

11111111111111111111111111111111111111111111111111Y1852711浙n:大学硕士学位论文致谢致谢首先我要感谢我的导师陈瑜教授，在我工作学习过程中，陈老师给予了方方面丽的指导和无微不至的关怀.在本文的完成过程中，陈老师从选题、实验、成文等各方面都给予我悉心的指导，使我能顺利地完成本课题的研究和本文的撰写.陈老师渊博的学识、严谨的治学态度、精义求精的工作作风和科学的思维方法，将使我终身受益.在此，我向陈教授致以真诚的谢意和崇高的敬意.衷心感谢浙江省合州医院颜卫华博士对我无私的真诚的帮助、实验支持和指导，衷心感谢我的问事许惠惠，潘映秋眩师对我无私的真诚的帮助及在实验的设计和操作过程中给予的指导.衷心感谢浙一检验科的楼滨对我无私的真诚的帮助，同时还要感谢我的同事郑瑞、组织库包卫光医师在实验过程中给予我帮助和指导.衷心感谢台州医院组织库林爱芬博士的实验指导和阮姆费医师在实验过程中的合力合作和帮助.最后，感谢我的父母和爱人和孩子，他们的支持是我不断前进的动力!‘7浙江大学硕士学位论文摘要46，XY女性性逆转患者的SF-l基因分析研究浙江大学医学院医学检验诊断学(遗传病学).，j硕士研究生陈雷娇导师陈瑜中文摘要背景与目的:性逆转综合征是一种由于性别决定和分化异常导致的两性畸形，其主要特征是患者的核型与表型相反，分为46，双男性和46，XY女性两型.目前对于性腺分化的分子机制、信号途径了解还很不够，对人类性腺分化的遗传调控的了解，也是问题远多于答案.通过遗传分析性逆转患者来研究胚胎性腺发育和分化等相关基因是一条比较便捷的通道?SF-l ( 又名NR5Al，月z-.凹，Ad4BP) 是核受体家族的一员，调节多数性腺发育和生殖基因，是和下丘胁脑垂体·生成类固醇轴相关的关键转录调节基因。SF-l 基因敲除老鼠展示了完全的肾上腺和性腺发育不全.随着在XY性腺发育不全和原发卵巢功能不全中不断发现的SF-l 基因突变充分说明了SF-l在肾上腺和性腺功能的操控和维护中起到了关键的作用。因而SF-l 是引起合并或无肾上腺衰竭的46，XY性腺发宵障碍的原因.本实验通过测序分析XY女性性逆转患者的SF-l基因突变情况来进一步认证SF-l与XY女性性逆转的相关?性e方法:收集2007年1月至2009年9月到我院就诊的女性临床表型但染色体核型却为46，XY的性逆转患者的EDTA抗凝全血和血清样本6例.首先检测血清性激素日系列和皮质醇，然后抽提DNA，再根据SF-l 的2，..，7外显子的序列设计的引物进行聚合酶链反应(PCR反应.最后对PCR产物直接测序分析以及对PCR产物检出的突变进行连接质粒后再测序和限制性内切酶分析的验证突变分析.针对未见报道的新突变，筛查110名表型和核型一致的无关个体，排除多态的可能.结果;在样本4的Exon4中检出了一个的新的突变(p.V128A)和…个报道过的多态突变(p.G146At样本1中也检出了一个和样本4相同的多态突变.p川28A在110例正常对照人群中未发现相同的突变，p.G146A在正常对照人群中检出了37.3%的突变率.6例样本中除了样本2的皮质醇低于正常值提示可能合并有肾上腺功能不企外，其余样本肾上腺功能均正常.结论:我们在46，XY性逆转中又检出了一个新的SF工l的基因突变，低事嗣患者中的突变检出率为25%，由此可以推断SF-l的基因突变和性逆转的发生是相关的.关键词:性逆转;SF-l基因;基因突变‘MolecularAnalysisofSteroidogenicFactor-l(SF-l，Ad4BP，NR5Al)in46，XYFemaleSexReversalCollegeofMedicine，ZhejiangUniversity Ph.M.CandidateXu司iaoChenSupervisorProf.YuChenAbstractBackgroundandObjective:sexreversa1syndromecharacterisedbydiscrepancyinkaryotypeandPhenotypeisahermaphrodismduetoabnormityofSexDeterminationanddifferentiation.Sex reversa1syndromeisdividedinto46，XXma1eand46，XYfema1e.Currentlyunderstandingofthemolecularmechanismandsigna1ingpathwaysforgonada1differentiation，andthegeneticregulationofsexua1differentiationofhumanaremore pro