免疫应答的基本概念.pptVIP

第三节 细胞凋亡与免疫 1972年，Kerr等首先提出了细胞凋亡是不同于坏死的一个主动的自我破坏过程。 1980年，Wyllie等在用糖皮质激素诱导胸腺T细胞死亡的实验中，观察到一系列形态学和生物化学的变化，与常规坏死不同，认为这是细胞内基因调控发生的有序的死亡过程，并提出了细胞程序性死亡(programmed cell death，PCD)的概念。 细胞凋亡(apoptosis)或程序化细胞死亡(programmed cell death,PCD) 是多细胞有机体为调控机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞主动死亡过程，是细胞衰老自然死亡的主要方式之一。由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控，所以又被称为程序化细胞死亡。 免疫系统识别外来异物和自身组织的功能的形成，必须依靠对自身起反应的淋巴细胞的删除(deletion)，而这种删除过程主要是通过细胞凋亡来完成的。淋巴细胞对靶细胞的杀伤过程部分也是通过诱导靶细胞凋亡来实现的。 细胞凋亡过程如果出现紊乱，机体可能出现严重的病理状态，如肿瘤、白血病、自身免疫性疾病(类风湿性关节炎、系统性红斑狠疮、强直性脊椎炎等)、免疫缺陷等。 通过细胞凋亡，机体得以消除不再需要的细胞，而不引起炎症反应。在哺乳动物的个体发育过程中，PCD也是广泛存在的，这种淘汰过程即是通过细胞凋亡实现的。发育过程中成熟组织的细胞发生凋亡的数量是惊人的，健康的成人体内，在骨髓和肠中，每小时约有10亿个细胞凋亡。 光镜下： 细胞凋亡 细胞凋亡的形态学检测 电镜下：凋亡的细胞皱缩，质膜完整，胞浆致密，细胞器密集，不同程度退变；核染色质致密，形成形状不一，大小不等的团块边集于核膜处，进而胞核裂解；胞浆发生芽突。胞浆芽突脱落后，形成许多凋亡小体。 电镜下： 细胞凋亡 常用的DNA特异性染料有：碘化丙啶(P1)可以使死细胞染色，但不染活细胞和凋亡细胞，并能在紫外光下发出红色荧光 ；HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。后三种染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。 结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体 透射电子显微镜观察　　 结果评判：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。 透射电子显微镜 用于凋亡细胞 的检测 流式细胞术语分析 细胞凋亡的生物化学检测 细胞凋亡的免疫学检测方法 有时凋亡细胞数较少，用DNA梯度分析法则难以测出来，必须用更灵敏的方法，而酶联免疫分析法(ELISA)可以达到这个要求，ELISA作为一种免疫学方法来检测细胞凋亡有许多优点，如灵敏度高、需要的细胞数少、最低可检测到50个细胞凋亡，且可同时对多份样品进行检测，抗体没有种属特异性，可用以测定不同种属细胞凋亡，测定时方法较简便，不需要预先标记细胞等。 * * * MHC II类分子（新合成）? MHC II-Ii链 (invariant chain)复合物 ? 离开内质网到达酸注： A. Ii链：由三个亚单位组成，每个亚单位肽链的一部分非共价键结合于一个MHC II类分子的肽结合槽内，以阻止MHC II类分子与存在于内质网中的肽或部分折叠的蛋白结合。 B. CLIP（class II-associated invariant chain peptide）：Ii 链被切割后留下的与MHCII分子结合的短肽片段 性内体 ? Ii链可被酸性蛋白酶（如组织蛋白酶） 切割 ? MHC II-CLIP复合物 ? 与HLA-DM结合 ? CLIP释放 ?* Ag（摄取内化）? 内体, pH下降为酸性? 同溶酶体融合成吞噬溶酶体(phagolysome), 含有 酸性蛋白酶 ? 蛋白质抗原被降解成小肽片段（在 酸性内体）?* *? MHC II类分子-肽复合物（在酸性内体） ? 细胞表面 ?TCR识别和同CD4分子结合（CD4T细 胞）。 注： A. Ii链：由三个亚单位组成，每个亚单位肽链的一部分非共价键结合于一个MHC II类分子的肽结合