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关于精氨酸对急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响 【摘要】目的: 探讨左旋精氨酸与急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的关 系. 方法: 以蛙皮素制造AP 模型，观察不同剂量L Arg 治疗AP 大鼠后，胰 腺组织中一氧化氮合酶（NOS）活性、一氧化氮(NO)的含量、胰腺腺泡细胞凋亡 及胰腺组织病理改变. 结果: AP胰腺组织中NOS 活性较正常胰腺组织中升高， 而此时胰腺组织NO 浓度反而降低，低剂量L Arg （75， 150 mg/kg）使胰腺 组织中NO 浓度升高致接近正常组水平，促进了胰腺腺泡细胞凋亡，减轻胰腺病 理损害；高L Arg 剂量（1200， 2400 mg/kg），胰腺组织中NO 浓度升高超 出正常组，胰腺腺泡细胞凋亡减少，胰腺病理损害加重. 结论: LArg 对AP 的的双重作用与NO 的生物活性有关. 小剂量可通过诱导胰腺腺泡细胞凋亡， 而起保护作用， 大剂量则有害. 【关键词】胰腺炎 细胞凋亡 左旋精氨酸 0 引言 近年来人们注意到轻症急性胰腺炎(AP)的胰腺腺泡细胞中存在着较多的细 胞凋亡， 而急性坏死型胰腺炎(ＡＮＰ)却很少出现细胞凋亡. 这提示细胞凋亡 在ＡＰ发展成ＡＮＰ的发病机制和发展过程中起着一定作用［1］. 精氨酸 （Arg）及其在体内的代谢产物NO，对AP 起一定的保护作用，可能是治疗AP 的一条新途径［2-3］. 一氧化氮（NO）作为一种信息分子参与了多种组织和细 胞的凋亡过程，其生物作用随浓度变化而截然不同. 为了探讨NO 的供体左旋精 氨酸（L Arg）治疗AP 的作用，我们观察了倍数剂量L Arg 治疗AP 大鼠后， 胰腺组织中NOS 活性、NO 的含量、胰腺腺泡细胞凋亡及胰腺组织病理的变化. 1 材料和方法 1.1 材料 健康成年SD 大鼠90 只（陕西省中医研究院实验动物中心提供），体质量 180~240 g(平均196±5) g. 按体质量统一编号，然后随机等分为9 组：假手 术组（A 组）、AEP （B 组）、生理盐水治疗组（C 组）、L Arg 75， 150， 300， 600， 1200， 2400 mg/kg 体质量治疗组（D， E， F， G， H， I 组）. 蛙皮素购自美国Sigma 公司，左旋精氨酸(LARG) 购自上海信谊制药厂，经 生理盐水稀释为25%溶液后使用， 原位凋亡检测试剂盒(武汉博士德生物工程 有限公司). 1.2 方法 1.2.1 模型制备与用药所有实验动物术前12 h 禁食，自由饮水，称取体质 量后，50 g/L 戊巴比妥（4 mL/kg）肌肉注射麻醉. 以腹腔内注射蛙皮素50.0 μ g/kg，1 次/h，连续2 次，制造AEP 模型，假手术组注射生理盐水. 4 h 后经 颈静脉注射L Arg(上海信谊制药厂 批号990302，经生理盐水稀释为25%溶 液后使用). 其后12 h 采取断颈方法处死动物，剖腹取材. 所取胰腺组织分成 两部分：一部分以40 g/L 甲醛固定，用于胰腺组织形态观察，并用TUNEL 方法 检测胰腺组织细胞凋亡；一部分制成匀浆，-20℃保存，用于测定胰腺组织ＮＯ Ｓ活性、ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度. 1.2.2 观察指标 ①采取相同部位的胰腺组织固定于40 g/L 甲醛溶液，常规方法制作病理切 片，HE 染色，光镜下观察. 胰腺炎组胰腺组织呈炎性改变. 对照组胰腺组织细 胞正常. 采用改良Grewal 等［4］的方法对胰腺炎组织损伤进行定量评估. 水 肿:0分=无水肿;1分=轻度叶间隙增宽;2分=重度叶间隙增宽;3分=腺泡间隙增 宽;4分=细胞间隙增宽. 坏死:0分=无坏死;1分=坏死面积1%～10%;2 分=坏死 面积11%～20%;3 分=坏死面积21%～30%;4 分=坏死面积30%. 炎症:以每高倍视 野计，每5 个炎细胞计0.5 分，超过30 个计4 分. 出血:0分=无出血;1分=有 出血.②采用TUNEL 方法检测胰腺组织细胞凋亡，染色步骤按说明书进行. 在光 镜下，根据调亡细胞的形态特征判断调亡细胞：单个腺泡细胞，周围无炎症反 应坏死，胞质收缩，细胞核呈棕黄色颗粒或核碎片，每张切片随机选择５~ １０ 个高倍视野，计数１０００个腺泡细胞中的凋亡细胞，用百分数表示，作为凋 亡指数（ＡＩ）.③胰腺组织ＮＯＳ活性测定: NOS活性测定采用南京建成生物 工程研究所提供的NOS 试剂盒， 按说明书操作. S500 P 紫外光可见光连续光 谱分光光度计比色， 波长为530 nm.④取胰腺组织