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2018-05-28 发布于上海
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lcn2对卵巢癌skov3细胞增殖及迁移的影响-effects of l cn2 on proliferation and migration of ovarian cancer sko v3 cells

LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞增殖及迁移的影响摘要卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，病死率极高，严重威胁着广大妇女的身心健康。由于缺乏有效的筛查手段，多数患者确诊时已处于晚期。在卵巢癌有明显症状时血清CA125、CA199等可作为监测病情的肿瘤抗原标记物，其敏感性较高，但特异性较差。为此，我们建立卵巢癌细胞模型寻找特异性肿瘤抗原标记物，并检测其在卵巢癌中的表达情况、以及对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响，为今后进一步探讨卵巢癌发病机制提供实验依据，以期为卵巢癌的防治提供新的思路和靶点。目的：脂质运载蛋白-2(lipocalin-2,LCN-2)属于脂质运载蛋白家族的第2号成员，LCN-2的上调与肝癌，乳腺癌，卵巢癌等多种人类肿瘤相关。然而，LCN-2在肿瘤细胞中的生物学作用还不是很清楚。本研究通过观察LCN-2在四种卵巢癌细胞系中的表达情况，并使用稳定过表达LCN-2的方法检测其对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响，为进一步研究LCN-2在卵巢癌细胞中的作用机制提供前期实验依据。方法：应用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测四种卵巢癌细胞系（CAOV3,ES2,OVCAR3,SKOV3）中LCN-2的表达情况；应用稳定转染法观察过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞生长的影响；应用MTT细胞增殖实验检测过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响；应用细胞划痕实验检测过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞迁移的影响。结果：1RT-qPCR结果显示：在mRNA水平上LCN-2的表达在四种卵巢癌细胞系中由高到低的趋势是：在CAOV3和OVCAR3呈高表达，在SKOV3表达较弱，在ES2表达最弱，差异具有统计学意义（P0.05）。2成功构建LCN-2稳定过表达的SKOV3细胞克隆。稳定转染空载体或目的质粒的SKOV3细胞系后，用1200μg/mlG418进行筛选，约四周后细胞克隆形成。RT-qPCR和Westernblot方法检测结果显示，稳定转染LCN-2基因的SKOV3细胞中LCN-2蛋白表达量均显著高于未转染组，差异具有统计学意义（P0.05）。镜下观察发现SKOV3细胞克隆和稳定转染LCN-2后的SKOV3细胞克隆形态无明显变化。3MTT细胞增殖实验绘制细胞生长曲线，结果显示：过表达LCN-2与对照组比较，对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有促进作用，结果有统计学差异（P0.05）。4划痕实验结果显示：过表达LCN-2与对照组相比，明显促进了卵巢癌SKOV3细胞的迁移，结果有统计学差异（P0.05）。结论：1成功构建了pcDNA/mycHis-LCN-2表达载体。2LCN-2在不同的卵巢癌细胞系中的表达有差异。3构建LCN-2稳定过表达的细胞克隆。4过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有促进作用。5过表达LCN-2对卵巢癌SKOV3细胞的迁移具有促进作用。关键词：LCN-2,卵巢癌细胞,细胞增殖,细胞迁移,SKOV3细胞EffectsofLCN-2onproliferationandmigrationofovariancancercellsSKOV3ABSTRACTObjective:Ovariancancerisoneofthethreecommongynecologicmalignanttumors.Epithelialovariancanceristhemostlethalandaggressivegynaecologicalcancer.Thehighmortalityrateofovariancancerresultsfromthehighpercentageofcasesdiagnosedatanadvancedstage,whichisbecauseoftherelativelyasymptomaticnatureofearly-stagediseaseandthelackofadequatescreeningtests.UseofserummarkersforearlydetectionofovariancancerhaslargelyfocusedonCA125orCA199.Accordingtodifferenttypesofcancer,theyhavedifferentchanges.Especially,someserummarkershaveincreasedinadvancedstage.Notuniversal,butitwasalreadyservesforearlydetectionandprognosisofovariancancerpatients.Lipocalin-2(LCN-2),alsoknownasneutrophilgelatinase-associatedlipoca