乳腺癌中趋化因子CCR7 CCL21表达与淋巴转移关系研究.docVIP

乳腺癌中趋化因子CCR7 CCL21表达与淋巴转移关系研究 　　【摘要】目的 探讨CCR7 CCL21对乳腺癌淋巴转移的作用。方法 选取无淋巴转移乳腺癌和淋巴转移乳腺癌各35例，应用免疫组织化学方法对比检测原发灶及其淋巴转移灶中CCR7 CCL21的表达及podoplanin标记的淋巴管密度。结果 无淋巴转移组CCR7、CCL21 阳性表达率明显低于淋巴转移组（p 　　【关键词】淋巴归巢 趋化因子 CCR7 CCL21 　　中图分类号：R737.9 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2012）3-063-03 　　 　　淋巴归巢实质就是淋巴细胞迁移并黏附到内皮细胞表面，SLC（CCL21）是淋巴结高内皮细胞微静脉惟一表达的趋化因子，CCL21为CCR7的配体之一，表达CCR7的T细胞受到趋化就在高内皮微静脉上滚动，并优先黏附在分布高表达CCL21的节段，CCR7不仅介导T 、B、树突状细胞穿过高内皮微静脉，而且能把它们正确定位在外周淋巴器官的T 、B细胞区。有研究表明淋巴内皮细胞通过分泌趋化因子吸引肿瘤细胞，进而主动性引导肿瘤细胞淋巴转移，这一过程类似于免疫刺激过程中淋巴归巢[2、3]。WILEY等发现使鼠的B16黑色素瘤高表达CCR7，能显著提高其向区域淋巴结的速度和效率，而且通过单克隆抗体阻断CCL21的作用能够阻止淋巴结转移的发生。MULLER等在发现乳腺癌组织中表达CCR7，而且与淋巴细胞一样一定浓度CCR7的配体能明显增加乳腺癌细胞内肌动蛋白的含量和聚合，这是恶性肿瘤侵袭组织和远处转移的早期事件，且表达CCR7的细胞有向其配体CCL21定向迁移的能力，并且存在浓度依赖性关系。然而乳腺癌中是否存在CCR7、CCL21的表达、其与淋巴管密度、淋巴转移之间的关系鲜见报道。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床病理资料 　　收集河北北方学院附属第一医院1998年1月―2005年12月住院患者中临床病理资料齐全的乳腺癌70例，浸润性导管癌58例，浸润性小叶癌12例，其中淋巴结转移35例，无淋巴结转移35例，资深病理医师对切片进行复习确诊，年龄35-69岁，平均年龄51岁。高分化16例，中分化38例，低分化16例。35例存在淋巴结转移，其中单侧腋窝淋巴结转移23例，双侧腋窝淋巴结转移12例。肿瘤直径最大6cm，最小1.2cm。 　　1.2 免疫组织化学染色 　　CCR7、CCL21一抗试剂均购自北京中山试剂公司，即用型，5ml包装。podoplanin单克隆抗体(112003,工作浓度1：200)，购自NEWMARK公司,即用型SP超敏试剂盒(SP29000和9003)，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。主要免疫组化步骤：二甲苯脱蜡、梯度酒精至水，3%双氧水灭活内源性过氧化酶，PBS缓冲液振洗，（采用专用微波炉进行抗原微波热修复），正常山羊血清封闭、一抗冰箱过夜，二抗 、三抗各1小时，DAB显色10-15分钟，复染核脱水透明，中性树胶封片。结果判断:着色细胞10%为阳性。CCR7、CCL21定位在细胞质或细胞膜。阳性对照片由试剂公司提供。利用PBS代替一抗作阴性对照。采用HIPAS100图象分析软件对所有切片进行图象分析，每张切片随机选取10个着色典型区域且不重复的视场，高倍镜（400倍）视野下测量每个视场中阳性单位，取其均数即为该切片的着色强度。 　　1.3 淋巴管密度计数 凡内皮细胞染成棕色(podoplanin表达阳性)的管道为单层内皮样细胞构成，周围没有明显的基底膜及平滑肌细胞，管腔内没有红细胞的均确认为淋巴管;而内皮细胞染成棕色但未形成管腔结构的不作为淋巴管计数。先在100倍显微镜下观察整张切片的淋巴管分布,计数最密集的5个高倍视野(X200)下的淋巴管数目,取均数作为淋巴管密度(lympaticmicrovesseldensity,LMVD)计数。 　　1.4 统计学处理 　　应用SPSS10.0统计软件进行统计学分析。不同组间表达率的比较采用Fisher精确概率法，各指标的表达水平以及与临床病理参数之间作直线回归相关分析。以α=0.05作为具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 各个指标非淋巴转移组与淋巴转移组阳性表达率比较 　　CCR7在乳腺癌非淋巴转移组中和淋巴转移组中肿瘤细胞的阳性表达率分别为56%（20/35）和14%（5/35），非淋巴转移组中肿瘤细胞阳性率明显低于淋巴转移组（p 　　肾小球足突细胞膜表面黏蛋白Podoplanin是特异性的淋巴管内皮标记物之一,相对分子质量为38103,它仅表达在淋巴管内皮,而在血管内皮中不表达，因此成为目前公认的淋巴管内皮细胞特异性标志物之一[13、14]。最近研究表明结直肠癌组织中存在新生淋