法舒地尔对弥漫性脑损伤大鼠camkiitak-1通路的影响-effects of fasudil on camkiatsk - 1 pathway in rats with diffuse brain injury.docxVIP

摘要目的 1 探索法舒地尔对弥漫性脑损伤大鼠 CaMKII/TAk-1 通路的影响。2 探索 法舒地尔对弥漫性脑损伤大鼠脑保护作用。方法清洁级健康 SD 雄性大鼠 144 只。按照随机数字表法将大鼠分为正常对照 组、模型组和法舒地尔低剂量组、法舒地尔高剂量组。采用 Marmarou 法制作急性 弥漫性脑损伤大鼠模型，造模成功后于 24h 行行为学评分，观察大鼠行为学改变； 再分别于 1h、3h、6h、12h、24h、48h 处死行 HE 染色观察脑组织形态学变化，行 免疫组织化学和 Western Blot 观察皮层脑组织 CaMKII 和 TAk-1 表达变化情况。结果 1 行为学评分结果：对照组大鼠神经行为学评分全部为 24 分，模型组大鼠 神经行为学评分大都在 7～9 分之间，法舒地尔组大鼠神经行为学评分大都在 11～ 13 分之间。与对照组比较，模型组大鼠行为学评分降低。与模型组比较，法舒地 尔组大鼠神经行为学评分升高，高剂量组较低剂量组明显。2 形态学结果：伤后大 体观察，模型制作成功后，几乎所有大鼠均可见外伤性蛛网膜下腔出血，脑实质可 见点片状出血。脑表面血管充血明显，未见脑组织明显损坏。HE 染色光镜观察结 果，对照组脑皮质组织结构大致正常，细胞大小形态正常，细胞排列规则，细胞核 蓝染，形态表现规则，细胞质红染。模型组损伤区可见明显出血，损伤脑组织周围 神经细胞表现为细胞肿胀，排列紊乱，胞浆染色较对照组淡染，透亮度增加，神经 细胞明显表现出变性、坏死。与模型组大鼠比较，法舒地尔组大鼠损伤区周围神经 细胞肿胀较轻，胞浆染色较模型组深染，透亮度下降，高剂量组较低剂量组明显。 3 CaMKII 免疫组化和免疫印迹：免疫组化，CaMKII 阳性表达主要位于细胞核， 可见阳性细胞被染成棕黄色。对照组可见一定量 CaMKII 阳性细胞，可见棕黄染 色。与对照组比较，模型组各时间点 CaMKII 阳性细胞明显增多；与模型组比较， 法舒地尔组中各时间点 CaMKII 阳性细胞明显减少，高剂量组较低剂量组明显。免 疫印迹，CaMKII 条带清晰，以β-actin 的吸光度值作为内参照，对各组条带的吸 光度值进行校正和半定量分析。与对照组比较，模型组 CaMKII 蛋白表达水平明显 升高；与模型组比较，法舒地尔组各时间点 CaMKII 表达水平明显降低，高剂量组 较低剂量组明显。4 TAk-1 免疫组化和免疫印迹：免疫组化，TAk-1 阳性主要表达 位于细胞核，阳性细胞可见被染成棕黄色的细小颗粒。对照组可见少量 TAk-1 阳 性细胞，棕黄染色。与对照组比较，模型组各时间点 TAk-1 阳性细胞明显增多； 与模型组比较，法舒地尔组中各时间点 TAk-1 阳性细胞明显减少，高剂量组较低- I -剂量组明显。免疫印迹，TAk-1 条带清晰，以β-actin 的吸光度值作为内参照，对各组条带的吸光度值进行校正和半定量分析。与对照组比较，模型组 TAk-1 蛋白 表达水平明显增高；与模型组比较，法舒地尔组各时间点 TAk-1 表达水平明显减 少， 高剂量组较低剂量组明显。结论 1 法舒地尔可明显增加颅脑损伤大鼠行为学评分。2 法舒地尔可减少颅脑损 伤大鼠大脑皮层 CaMKII 的表达，高剂量组较低剂量组明显。3 法舒地尔可减少颅 脑损伤大鼠大脑皮层 TAk-1 蛋白的表达，高剂量组较低剂量组明显。图 31 幅；表 5 个；参 88 篇关键词：法舒地尔；弥漫性脑损伤；CaMKII；TAk-1； 分类号：R651.1II -AbstractObjective 1 To explore the effect of Fasudil on the Rats Following Traumatic Brain Injury and the Expression of the Signal Channel CaMKII and TAk-1.2 To explore the effect of Fasudil on brain protection of the Rats Following Traumatic Brain InjuryMethods 144 cleaning and healthful sprague-dawley male rats were randomly divided into four groups: control group, model group and fasudil low dose group, fasudil high dose group. After manufacturing focal cerebral model one hour and every morning, fasudil gr