肺癌tumstatinα3iv表达及其临床意义研究-study on the expression of tum station α 3iv in lung cancer and its clinical significance.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 中英文缩略词对照表 abbreviations 英文缩写 英文全称 中文全称 Acr Acrylamide 丙烯酰胺 bp base pair 碱基对 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 cDNA complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 CD31 Human hematopoietic progenitor cell antigen 人造血干细胞抗原 Ct Threshold cycle 临界循环数 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦磷酸二乙酯 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate 脱氧核苷三磷酸 DW distilled water 去离子水 ECM extracellular matrix 细胞外基质 EDTA Ethylendiaminotetraacetic acid 乙二氨四乙酸 FQ Fluorescence quantitative 荧光定量 FCS fetal calf serum 胎牛血清 FGF Fibroblast growth factor 成纤维细胞生长因子 kb kilo base pair 千碱基对 kD kilo dalton 千道尔顿 MMP Matrix metalloproteinases 基质金属蛋白酶 MVD microvessel density 微血管密度 NF-kB Nuclear factor-kappa B 核转录因子 kB OD optical density 吸光度值 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 RGD Arginine-Glycine-Aspartic motif 精氨酸-甘氨酸-天冬 氨酸基序 RT PCR reverse transcription-PCR 逆转录 PCR SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基磺酸钠 Taq TNF Taq DNA polymerse tumor necrosis factor 耐热 DNA 聚合酶 肿瘤坏死因子 VBM Vascular basement membranes 血管基膜 VEGF Vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 PAGE PAGE 10 肺癌 tumstatin/α3(IV)表达及其临床意义研究 摘要 目的 tumstatin 是由 IV 型胶原 α3 链的中间 3 股螺旋区域 C-端 12 个氨基酸和非胶 原区 1（NC1）232 个氨基酸，共 244 个氨基酸组成。对体外、体内新生血管形成 和肿瘤移植瘤模型的研究表明重组 tumstatin 显著抑制血管内皮细胞增殖、特异性 诱导内皮细胞凋亡，进而抑制肿瘤生长。本研究利用 Taqman 技术，建立荧光定量 逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法，定量检测肺癌组织中 tumstatin/Ⅳ型胶原 α3 链[α3(IV)] mRNA 表达水平，运用免疫组化和 Western-Blot 法检测相应组织 tumstatin/IV 型胶原 α3 链蛋白表达水平，评价肺癌患者 tumstatin/α3(IV)基因表达和 蛋白表达及两者之间的变化在肺癌发生发展中的临床应用价值。 方法 ①收集已确诊的行手术切除的原发肺癌患者 48 例，获取肺癌组织及癌旁正 常组织。②在 α3(IV)基因 NC1 结构域编码序列设计一对引物和一条 Taqman 探针； 优化反应体系的条件，以不同质粒 DNA 含量为标准品和其循环阈值(Ct 值)制作标 准曲线，检测肺癌组织中 α3(IV) mRNA 含量；并对本方法进行方法学评价。③采 用蛋白免疫印记(Western-Blot)方法和免疫组化检测肺癌组织和癌旁组织标本中 tumstatin/α3(IV)蛋白表达水平，进一步探讨肺癌发生发展与其蛋白表达之间的关 系。④CD31 单抗检测肺癌组织和癌旁组织血管密度 MVD，分析 tumstatin/α3(IV) 与 MVD 的相关性。 结果 成功建立了 α3(IV)基因 mRNA 表达实时荧光定量 PCR 检测方法，检测灵敏 度为 800 拷贝/μl；在 103～108 拷贝/μl 之间与 Ct 值具有很好的线性关系；PCR 扩 增效率为 99.4％；肺癌组织中 α3(IV) mRNA 表达定量检测发现，48 例肺癌患者肺 癌组织 α3(IV) m