正向间接血凝检测猪瘟抗体水平 猪瘟抗体检测 猪病防治课件幻灯片课件.pptVIP

一、实验目的 掌握间接血凝测定猪瘟抗体的方法 二、材料用具 猪瘟间接血凝抗原（猪瘟正向血凝诊断液）、阳性对照血清、阴性对照血清、稀释液、待检猪血清样品、96孔110°微量血凝板 、微量移液器10-100微升 、玻璃板。 ;三、反应原理; 四、操作方法;5、?稀释阴性血清（稀释1：4） 在血凝板上的第11排第1孔加稀释液60ul，取阴性血清20ul混匀，这样此孔阴性血清稀释度为1：4。 6、稀释阳性血清（稀释1：512) 在血凝板上的第12排第1孔加稀释液70ul，第2孔―第7孔各加稀释液50ul ，吸取阳性血清10ul，加入第1孔混匀并从中取出50ul加入第2孔……直到第7孔混匀并丢弃50ul。第7孔中的阳性血清稀释度则为1：512。 ;7、加对照孔 取1：4稀释的阴性血清50ul加入第一排第10孔，取1：512稀释的阳性血清50ul加入第一排第11孔，取稀释液50ul加入第一排第12孔，分别作阴性、阳性和稀释液对照。 8、加间接血凝抗原 在第1排1－6孔和对照孔各加血凝抗原25ul. 9、振荡 血凝板在振荡器上或用手轻拍摇动，使诊断液中的红细胞与血清混匀。 10、盖上与血凝板相符的玻璃板，以防水分蒸发，在室温下（10-36℃）静置2h判断结果。;六、临床应用;七、注意事项; 5、?液体血凝抗原4-8℃贮存，有效期三年。 6、 如来不及判定结果或静置2小时结果不清晰，也可放置第二天判定。 7、?每次检测，要设阴性、阳性血清对照各1孔。 8、吸取不同样品时，必须更换塑料枪头。; 口蹄疫血清抗体检测 ;（二）实验方法 ;（3）稀释阴性对照血清（稀释1：64） 在血凝板上的第11排第1孔加稀释液70ul，第2－4孔各加稀释液50ul，取阴性血清10ul加入第一孔混匀，并从中取出50ul加入第2孔混匀后取出50ul加入第3孔混匀后取出50ul加入第4孔，这样第4孔中阴性血清稀释度为1：64。 ;（4）稀释阳性血清 在血凝板上的第12排第1孔加稀释液70ul，第2―7孔各加稀释液50ul 。吸取阳性血清10ul，加入第1孔混匀并从中取出50ul加入第2孔……直到第7孔混匀，这样第7孔中阳性血清稀释度则为1：512。 （5） 滴加对照孔 取1：64稀释的阴性血清50ul加入第一排第10孔，取1：512稀释的阳性血清50ul加入第11孔，取稀释液50ul加入第12孔，分别作阴性、阳性和稀释液对照。 ;（6）滴加正向血凝诊断液 将正向诊断液充分摇匀后，每孔各加25ul，置于振荡器上震荡1分钟。 （7）盖上与血凝板相符的玻璃板，以防水分蒸发，在室温下（10-36℃）静置2h。 ;（8）判断结果 先检查对照孔是否合格 阴性血清对照孔，红细胞应全部沉入孔底或只有25%的凝集；阳性血清对照应呈50%(++)以上凝集，证明该批诊断液的效价达1：512为合格。稀释液对照孔红细胞应全部沉入孔底或只有25%的凝集。 在对照合格的情况下，观察待检血清各孔的凝集程度，以呈“++”凝集的待检血清最大稀释度为血凝效价（血凝价）。 猪口蹄疫油佐剂灭活疫苗（O型）接种种猪的抗体水平达到1：128以上为免疫合格。 ;2. 用于鉴别诊断的正向间接血凝试验 ;4. 滴加对照孔 取1：64稀释的口蹄疫O型阴性血清50ul加入第一排第10孔，取1：512稀释的口蹄疫O型阳性血清50ul加入第11孔，取稀释液50ul加入第12孔，分别作阴性、阳性和稀释液对照。第二排10-12孔分别加入稀释好的口蹄疫A型阴性血清、阳性血清和稀释液。第三排10-12孔分别加入稀释好的口蹄疫C型阴性血清、阳性血清和稀释液。第四排10-12孔分别加入稀释好的口蹄疫Asia-1型阴性血清、阳性血清和稀释液。第五排10-12孔分别加入稀释好的猪水泡病阴性血清、阳性血清和稀释液。 ;5. 滴加正向血凝诊断液 将正向诊断液充分摇匀后，每孔各加25ul，第一排滴加口蹄疫O型间接血凝诊断液，第二排滴加口蹄疫A型间接血凝诊断液, 第三排滴加口蹄疫C型间接血凝诊断液，第四排滴加口蹄疫Asia-1型间接血凝诊断液，第五排滴加猪水泡病间接血凝诊断液。置于振荡器上震荡1分钟。 6. 盖上与血凝板相符的玻璃板，以防水分蒸发，在室温下（10-36℃）静置2h。 ; 7. 判断结果 先检查对照孔是否合格，在各排第10-12孔都成立条件下。观察1-5排第1-8孔，如果某排1-8孔出现100%-50%凝集，其余四排仅在1-3孔出现50%-25%凝集，便可判定该份待检血清为阳性，其型别与所加的血凝抗原型别相同。 本法尚不能区分感染性抗体和免疫性抗体。为此，欲使本法用于鉴别诊断，采血时必须要弄清该批动物是否接种过口蹄疫或猪水泡病疫苗。 ;