sema3a对小鼠骨髓来源的dc细胞表面分子b7-h3表达影响的实验分析-effect of sema 3a on b7 - h3 expression in mouse bone marrow-derived dc cells.docxVIP

ConclusionTheexpressionofB7-H3onmatureDCwasrisingwithtime.Sema-3A-Abdown-regulatedtheexpressionofB7-H3onmatureDC.Sema3AcanincreasetheexpressionofB7-H3onmatureDC.Thecurrentstudywasnosignificantdifferencebetweentheinterventiongroupofdifferentconcentration.KeyWordssema3A;B7-H3;dendriticcell;cellculture;immunefunction独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。紧握所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日Sema3A对小鼠骨髓来源的DC细胞表面分子B7-H3表达影响的实验研究硕士研究生：李佳多导师：潘铁成教授华中科技大学同济医学院附属同济医院心胸外科武汉430030前言树突状细胞（dendriticcell,DC）是机体内的一种抗原递呈细胞（APC），能在体内直接激活初始T细胞，在调节机体免疫功能中起关键作用[1]，在肿瘤免疫、抗感染免疫及移植免疫中起重要作用[2,3]，该作用在很大程度上取决于DC表面免疫分子的表达以及与其他免疫细胞间的信号传递[4,11]。抗原递呈细胞（APC）表面分子提供的共刺激信号参与启动T细胞介导的免疫应答反应[5],共刺激信号对T细胞抗原特异性激活是必须的，并有启动，维持以及调节活化级联反应的作用[6]。B7-H3（B7homologue3）是DC表面的一种免疫分子，于2001年由Chapoval等[7]发现，新近才被证实为B7家族成员,它属于免疫球蛋白的超家庭成员，是一种共刺激信号分子。B7-H3作为共刺激分子在促进T细胞增殖，选择性刺激IFN-γ分泌，促进急、慢性异体移植排斥反应和抗肿瘤免疫等方面发挥作用。信号素（Semaphorins，Semas）广泛分布于神经系统。在神经系统中，信号素Semas参与神经轴突的导向、成束、分支等多种过程，而且对突触形成具有重要调控作用。信号素Semas最早的功能定位于神经轴突导向分子，而引起人们特别注意的是，信号素家族成员与肿瘤生长、细胞迁移、血管生成及免疫反应等多种病理、生理现象密切相关[8]。值得关注的是，已有研究证实在DCs介导的免疫应答的过程中，多种Semas分子参与对DC参与免疫反应中抗原提呈作用的功能和生物功能活性的调节[9]。近期研究表明，DC可表达Sema3A[10]。Sema3A是脊椎动物Semas家族中唯一的可溶性蛋白分子，Sema3A影响DC功能的机制尚不明确，本研究通过观察Sema-3A-Ab对DC表面B7-H3表达的影响，探讨Sema3A影响DC功能的可能机制。1、实验材料和方法1.1材料1.1.1主要试剂RMPI1640全培养液含RMPI1640培养基（Gibco公司）、10％新生牛血清（Gibco公司）、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素及5×10-5M2-巯基乙醇(Amerco公司)。红细胞裂解液由本室配制。重组小鼠细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Recombinantmicegran-ulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，rmGM-CSF）及重组小鼠白介素-4(Recombinantmiceinterleukin-4，rmIL-4，RD公司)，脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS,Sigma公司）。流式单克隆抗小鼠CD11c(PE-anti-mouse-CD11c-antibody,abcm公司)、B7-H3(PE-anti-mouse-B7-H3-antidody，eBioscience公司)，CD86（PerCP-CY5.5-anti-mouse-CD86-antidody，Biolegend公