HPLC法测定心可宁滴丸中丹酚酸B含量.docVIP

HPLC法测定心可宁滴丸中丹酚酸B含量 　　摘 要：目的：对中药复方制剂心可宁滴丸中的丹酚酸B进行含量测定。方法：采用高效液相色谱法，以乙腈?-0.1％?磷酸水液（21.5∶78.5）为流动相；检测波长为286nm。结果：丹酚酸B在0.196～1.960 μg范围内均与色谱峰面积呈良好的线性关系，r为0.99996，平均加样回收率为97.83%（N＝5），RSD=3.33%。 结论：本方法快速简便，灵敏度和稳定性高，为心可宁滴丸的质量标准奠定了良好的基础。? 　　关键词：高效液相色谱；心可宁滴丸；丹酚酸B? 　　 　　心可宁滴丸为卫生部药品标准中药成方制剂第九册（WS3B171494）收载的中成药经过改剂而成，由丹参、三七、冰片、蟾酥等八味中药组成，主要用于治疗冠心病、心绞痛、胸闷、心悸、眩晕等症［1］。中国药典2005年版一部中，丹参药材增加了水溶性有效成分丹酚酸B的含量测定［2］。由于心可宁滴丸制备工艺中丹参采用水提，故为了更好地控制产品质量，保证用药安全、有效，采用了高效液相色谱法对丹酚酸B含量进行测定，为心可宁滴丸的质量提高奠定了良好的基础，报道如下。? 　　 　　1 实验部分? 　　 　　1.1 仪器与试剂? 　　仪器：Agilent1100高压液相色谱仪系列（美国），Sartorius BP211D电子分析天平（德国），电热恒温水浴锅（北京市医疗设备厂），超声清洗器（北京医疗设备二厂），丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所111562200403），心可宁滴丸（自制，批号分别20070301；试剂：乙睛为色谱纯，甲醇、磷酸等其它试剂均为分析纯，水为三蒸水。? 　　1?2 方法与结果? 　　1.2.1 色谱条件? 　　Agilent Hypersil ODS（4.6mm*150mm，5μm）；乙腈－0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）为流动相；检测波长为286nm。流速1.0ml/min，柱温25℃。理论塔板数按丹酚酸B峰计应不低于5000。? 　　1.2.2 对照品溶液的制备? 　　称取丹酚酸B对照品，置量瓶中，加水溶解，制成0.098mg/mL的溶液，摇匀，即得。? 　　1.2.3 供试品溶液的制备? 　　取心可宁滴丸适量，碾碎，取约0.4g，精密称量，置于100ml具塞锥形瓶中，加入水50ml称重，超声处理90min（250W，30kHz），取出，放冷，再称重，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液10ml，取续滤液过0.22um微孔滤膜，即得供试品溶液。? 　　1.2.4 阴性对照溶液的制备? 　　取缺丹参药材的配方混合物，按照供试品溶液的制备方法同法制备成溶液，作为阴性对照品。? 　　 　　 　　1.3 方法学考察? 　　1.3.1 标准曲线的绘制? 　　分别吸取对照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、15μl、20μl注入色谱仪，以峰面积积分值（mAU*s）对进样量（μg）进行回归，得回归方程：Y=496.321X?-3.078，?r=0.99996，结果表明，丹酚酸B在0.196～1.96 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。? 　　1.3.2 稳定性试验? 　　取同一批号供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24h的不同时间点进行测定，考察保留时间和峰面积的一致性，丹酚酸B的平均保留时间为11.69min，RSD为0.047%，平均峰面积为487.2 mAU*s，RSD为0.12%。? 　　1.3.3 精密度试验? 　　取上述对照品溶液，连续进样5次，考察色谱峰保留时间和峰面积的一致性。丹酚酸B的平均保留时间为11.64min，RSD为0.11%，平均峰面积为486.4mAU*s，RSD为0.25%。? 　　1.3.4重现性试验? 　　取同一批号供试品，称取5份，同法提取，检测，考察色谱峰保留时间和峰面积的一致性。丹酚酸B的平均保留时间为11.62min，RSD为0.34%，平均峰面积为486.5 mAU*s，RSD为1?31%。? 　　1.3.5 回收率试验? 　　取同一批号已测知含量的样品0.2g 5份，精密称定，分别准确加入1.20mg/mL对照品溶液各?1mL，?按供试品溶液制备方法进行提取，分别取10μL进样，测定，计算回收率，结果得到丹酚酸B平均加样回收率为97.83%，RSD=3.33%。见表1。? 　　 　　1.3.6 供试品的测定? 　　分别20070301样品0.4g，精密称定，按供试品制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液10L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，结果得到丹酚酸B含量分别为6.27