生物质谱及其联用新技术的研讨.pdfVIP

生物质谱及其联用新技术的研究 摘要 ， (本论文工作研究了生物质谱在蛋白质和蛋白质组分析中的应用和联用的新 技术、新方法，建立了质谱和质谱／质谱分析蛋白质和混合蛋白质的新方法，发 展了以一维和多维高效液相色谱分离．质谱在线鉴定为手段的蛋白质组学新技 术，并分析了实际的蛋白质样品。 随着蛋白质组学的兴起，生物质谱技术以其独有的优势成为蛋白质组学研究 中的核心技术。从现在来看，蛋白质组学的研究分两个方向，一是与高通量、高 效的分离技术结合，大规模、高效率、高准确性地鉴定一个组织或细胞乃至亚细 胞中的全部蛋白质。另一方向是利用稳定同位素标记方式与多维分离．质谱／质谱 实现大规模的蛋白质定量分析。而质谱是实现这两大目标的一个核心分析技术。 目前，用生物质谱及相关技术研究鉴定蛋白质的方法学仍在不断发展，包括： 发展高通量、快速、高效的联用技术；进行有效的样品处理，将复杂体系简单化： 通过软件技术，从大量谱图中进行有用信息的提取和解析：蛋白质数据库的丰富 及搜索方法的优化和改进。故此，这一课题是综合了分析化学、生命科学、生物 信息学、计算机技术等在内的前沿性研究。对上述问题进行探索性研究，具有深 刻的学术与应用意义。斗 本论文首先利用生物质谱及相关分离技术建立了蛋白质分析的新方法，并优 化了实验条件，包括分子量的精确测定、肽的氨基酸序列、蛋白质的肽谱分析： 同时对部分具有非共价键作用的蛋白质样品进行了分析，拓宽了质谱在蛋白质研 究中的应用范围。 针对蛋白质组学提出的实现快速、高通量蛋白质鉴定的要求。发展了以一维 和多维高效液相色谱分离．质谱／质谱在线鉴定为手段的蛋白质组学新技术，并分 析了实际的蛋白质样品一红细胞膜蛋白质。鉴于这一方法体系对于膜蛋白质的鉴 定有独特的优越性，可以克服传统二维凝胶电泳对于分子量、等电点比较极端的 蛋白质的歧视效应，我们希望利用这一技术实现红细胞膜蛋白质的差异分析，发 现病变的关键因子。 关键词：蛋白质组学i生物质谱；肽谱分析i多维色谱 New ontheBiomass and Study Spectrometry Technique Related Pre—separation TheresearchstudiesinthisthesisfoCUSonthe ofBiomass application the of and wellassome analysisproteinproteomics．as Spectrometry(Bio·MS)in new andmethodscombinedwithMS．To and identify separationtechniques proteins ofHPLC／microHPLCandBio—MShasbeen efficiently,thehyphenation proteome new inone HPLCand some techniques dimensional investigated，including multidimensionalHPLC．Theestablished havebeenutilizedto