桔小实蝇为害柑橘的生物学特性及其嗅觉感受机制分析-biological characteristics and olfaction mechanism of bactrocera dorsalis against citrus.docxVIP

本研究承蒙浙江省重大农业科研专项(2006C12020)、 农业部农药残留检测重点实验室开放基金(2012PRG02)、 浙江省植物有害生物防控省部共建国家重点实验室培育基地开放基金(2010DS700124-KF1209)资 助致谢光阴似箭，转眼三年已过，又到了毕业时光。回想这三年，有失败后的沮 丧，也有成功后的喜悦，但不管怎样，在本论文即将完成的时刻，我把最诚挚 的感激和谢意给予这三年来指导、鼓励、帮助、关心和理解的老师、同学、朋 友和家人。首先要感谢导师商晗武研究员和李红亮副教授的指导和关怀，从开始的论 文选题、实验设计、实验进行过程中出现的种种问题的解决以及论文完成和论 文的反复修改到最后的定稿，这每一个过程都倾注了导师的大量心血。他们严 肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着 我。值此论文完成之际，我把最衷心的感谢和崇高的敬意给与他们。本研究是在中国计量学院生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重 点实验室完成的。学位论文的顺利完成，离不开研究所良好的实验平台和各位 老师的关心和帮助。感谢生命科学学院的老师；感谢外来入侵课题组的崔旭红 老师、高永生老师、蔡冲老师在工作和学习中给予我的帮助和启发；感谢浙江 省农业厅邵宝富老师对我的论文修改提出宝贵的意见。感谢外来生物课题组周宇翔、赵新宁、黄伟峰、倪翠侠、王艳艳等师兄师 姐的指导和帮助，感谢张林雅、陈毅超、谭椰、徐文彦、赵磊等同学师弟师妹 在实验过程中的协助。在此向他们表示衷心的感谢。此外，我要特别感谢我的父母，焉得谖草，言树之背，养育之恩，无以回 报，以及诸多亲朋好友多年以来对我的无限关爱，没有他们在后面默默的支持， 我也不会坚持到今天，更不会全神贯注地学习，顺利完成学业。当然帮助和支持我的人还有很多，在这里可能没有一一提及，但是我还是 想要跟他们说一句，谢谢你们的关心和帮助，没有你们，我也许不会走的更远。最后，谨向所有关心、支持和帮助我的领导、老师、同学和朋友再次表示 感谢，同时向参加论文评阅、评议及答辩委员会的专家、教授表示诚挚的感谢！陈玲2013 年 6 月桔小实蝇为害柑橘的生物学特性及其嗅觉感受机制研究摘要：桔小实蝇是一种重要的检疫性害虫，可选择香蕉、柑橘和芒果等多种水 果作为寄主，其危害方式主要是以雌虫产卵于果皮下，幼虫取食果肉，从而导 致水果腐烂或未熟先黄而落，严重影响了水果的产量和品质，有的甚至完全失 去食用价值，给水果产业造成了严重的经济损失。目前对桔小实蝇的综合防治 过程中，诱剂诱杀是一种既有效又环保的防治措施，但目前采用的甲基丁香酚 仅引诱雄虫，而桔小实蝇的危害方式特殊，给防治带来困难。此外，化学防治 又不符合绿色环保的理念，所以开发桔小实蝇雌虫诱剂已成为一种新的生防思 路。本论文研究桔小实蝇为害几种不同柑橘的生物学特性及其嗅觉感受机制， 为开发桔小实蝇雌虫诱剂提供实验依据。主要是研究内容和结果如下：1. 桔小实蝇取食不同柑橘年度间生物学特性的差异研究连续两年对桔小实蝇取食 4 类 7 种柑橘，即宽皮柑橘类的大叶尾张、本地 早、宫川、椪柑，杂柑类的胡柚，金柑类的金桔，和枸橼类的柠檬等柑橘类果 实后生活史变化的观察，结果表明桔小实蝇的幼虫历期与蛹历期呈显著的负相 关性，相关系数为-0.812；而一般，虫轻蛹壳重与虫重蛹壳轻的，其存活率均不 高；而蛹壳重（0.95 mg -1.0 mg）或虫体重适中（12 mg-15 mg）的桔小实蝇存 活率均较高。尤其是金桔，两年的存活率分别为 95%与 80%，均属第一位；其 次是椪柑、本地早等宽皮桔类，以柠檬和宫川为最低。不同年度间宽皮橘和杂 柑类各品种上的性比较稳定，性比值均1，其中椪柑上雌虫数稳定多于雄虫； 而胡柚上雄虫数稳定多于雌虫。此外，根据幼虫历期及其相应的成虫或蛹及蛹 壳的轻重，可初步推断金桔是桔小实蝇生长较适宜的果品，而柠檬为不太适宜 的果品。经生命表分析，在胡柚上桔小实蝇净增殖率 R0、内禀增长率 rm 与周期 增长率 λ 最大，种群加倍时间 DT 最短；在柠檬上 R0、rm 和 λ 值最小，而 T 和 DT 最长，而其他品种间差异不大。2. 桔小实蝇气味结合蛋白 BdorOBP2 的基因克隆、表达和纯化利用 PCR 技术克隆得到了桔小实蝇气味结合蛋白基因 BdorOBP2 开放阅读 框全长，GenBank 登录号为 KC773766。序列分析表明，BdorOBP2 的 ORF 长 约 447 bp，编码了 148 个氨基酸；多重序列比对结果表明，BdorOBP2 蛋白与拟 黄果蝇和黑腹果蝇的序列相似性最高；通过系统发育分析，桔小实蝇与双翅目I昆虫的亲缘关系较近，特别是葱地种蝇的 DantOBP2。并且构建了 BdorOBP2 原核表达载体，诱导表达获得了 Bdo