桔梗皂苷的抗氧化及脂质调节作用分析-analysis of anti-oxidation and lipid regulation effects of platycodon grandiflorum saponin.docxVIP

目录缩略词i中文摘要 IABSTRACTIV第一部分 综述11．桔梗的化学成分12．桔梗的生物学活性33．桔梗皂苷的毒性6参考文献6第二部分 实验12第一章 桔梗总皂苷的制备131．实验材料与仪器132．实验方法142．1 大孔树脂吸附法制备桔梗总皂苷142．2 超声波－水提法制备桔梗总皂苷152．3 硅胶柱分离桔梗皂苷 D152．4 桔梗总皂苷的鉴定162．4．1 理化鉴别162．4．2 TLC 定性分析162．4．3 香草醛-高氯酸分光光度法定量分析162．5 桔梗皂苷 D 的鉴定162．5．1 理化鉴别162．5．2 TLC 定性分析162．5．3 HPLC 色谱定量分析173．实验结果174．讨论21参考文献24第二章 桔梗总皂苷的抗氧化作用研究261．实验材料与仪器262．实验方法272．1 桔梗皂苷体外抗氧化272．1．1 DPPH 清除活性272．1．2 还原力测定282．2 高脂动物体内抗氧化282．2．1 动物分组及造模方法282．2．2 给药方法292．2．3 血清与肝组织匀浆准备292．2．4 血清与肝脏 T-AOC 检测292．2．5 血清与肝脏 SOD 检测302．2．6 血清与肝脏 MDA 检测312．3 统计学处理323．实验结果323．1 DPPH 清除与还原力323．2 T-AOC、SOD 和 MDA 检测结果334．讨论35参考文献39第三章 桔梗总皂苷对高脂大鼠脂质变化的影响 41 1.实验材料与仪器412．实验方法422．1 动物分组及造模方法42I2．2 给药方法422．3 TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB 测定 422．4 肝脏组织形态学检测422．5 统计学处理433．实验结果444．讨论50参考文献54第四章 桔梗总皂苷对胆固醇代谢的影响研究 57 1．实验材料与仪器582．实验方法592．1 动物分组及造模方法592．2 给药方法592．3 肝脏 LDL-r 蛋白表达592．3．1 冰冻切片制作592．3．2 免疫组织化学实验592．3．3 切片图像处理602．4 肝脏 HMG-CoA-r 蛋白表达602．4．1 肝微粒体制备602．4．2 肝微粒体总蛋白质含量的测定612．4．3 Western-blotting 实验612．5 肝脏 CYP7A1 基因表达612．5．1 总 RNA 提取612．5．2 cDNA 的反转622．5．3 CYP7A1 基因的 PCR622．6 粪便中的胆汁酸提取与测定632．7 统计学处理643．实验结果644．讨论69参考文献72第五章 桔梗皂苷 D 对 OxLDL 诱导的内皮细胞的影响研究761．实验材料与仪器762．实验过程772．1 细胞培养772．1．1 人脐静脉血管内皮细胞的培养772．1．2 人单核细胞的培养772．2 桔梗皂苷 D 对内皮细胞的细胞毒研究782．2．1 台盼蓝排除研究782．2．2 MTT 研究782．2．3 LDH 研究792．3 NO 和 MDA 测定792．4 VCAM-1 和 ICAM-1 基因表达802．5 单核-内皮细胞粘附实验 812．6 统计学处理813．实验结果814．讨论89参考文献101结论 110附录：动物实验伦理审查批件 112致谢 113攻读博士学位期间发表文章 114II缩略词PGTS：桔梗总皂苷 PD：桔梗皂苷DDPPH：1，1-二苯基-2-三硝基苯肼 BHT：2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚 NC：普通饲料大鼠对照组 HE：高脂乳剂诱导高脂大鼠对照组 MC：阳性药物辛伐他汀大鼠对照组 HTS：高剂量桔梗总皂苷处理大鼠组 MTS：中剂量桔梗总皂苷处理大鼠组 LTS：低剂量桔梗总皂苷处理大鼠组 TC：总胆固醇TG：甘油三酯HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇 LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇 ApoAI：载脂蛋白AI ApoB：载脂蛋白B AI：动脉硬化指数 MAD：丙二醛T-AOC：总抗氧化能力 SOD：超氧化物岐化酶HUVEC-12：人脐静脉内皮细胞 THP-l：人单核细胞株 CON：正常内皮细胞对照组LDL-r：低密度脂蛋白胆固醇受体 MOD：氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞对照组 A：低剂量桔梗皂苷D处理内皮细胞组 B：中剂量桔梗皂苷D处理内皮细胞组iC：高剂量桔梗皂苷D处理内皮细胞组SIM：阳性药物辛伐他汀处理内皮细胞对照组 OxLDL：氧化型低密度脂蛋白HMG-CoA-r：3-羟基-3-甲基-辅酶A还原酶 CYP7A1: 胆固醇7α-羟化酶1 GADPH：甘油醛-3-磷酸脱氢酶VCAM-1：动脉细胞粘附分子-1 ICAM-1：细胞粘附分子-1LDH：乳酸脱氢酶（Lactic Dehydrogenase）MTT：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-