运动对肥胖大鼠血浆和下丘脑NPY蛋白及其基因表达影响.docVIP

运动对肥胖大鼠血浆和下丘脑NPY蛋白及其基因表达影响 　　摘要：目的：一次性运动对肥胖大鼠摄食量、血清学指标、血浆和下丘脑NPY蛋白及其基因表达的影响。探讨运动影响摄食量和体重的分子生物学机制。方法：肥胖建模成功大鼠分为对照组、即刻组、1h组、3h组、12h组和24h组，分别在一次性跑台运动后不同时间段观察大鼠进食量并测试相关指标。结果：一次性运动后肥胖大鼠摄食量明显下降，血糖和血脂等在运动后即刻没有明显变化，在运动后的恢复期开始明显下降。恢复后期才逐渐恢复到正常水平。血浆NPY水平显著下降，下丘脑NPY水平明显上升，而下丘脑NPY基因表达变化不明显。结论：肥胖大鼠运动后摄食量下降；下丘脑NPY分泌增加而合成没有明显增加；下丘脑NPY蛋白增加可以促进机体运动后摄食，防止能量的进一步消耗，有利于运动后的能量恢复。 　　关键词：肥胖；运动；摄食量；神经肽Y 　　中国??类号：G804.7 文献标识码：A 文章编号：1007-3612(2009)01-0062-03 　　 　　体重主要是由运动消耗能量和食物摄取平衡来决定的。而运动又对运动后的食物摄取有较大影响，因此运动、运动后的食物摄取和体重三者是相互循环关联的。本研究通过运动对肥胖大鼠血浆和下丘脑NPY及其基因表达的影响来观察运动对肥胖大鼠摄食量影响，进一步探讨运动影响肥胖大鼠摄食量的分子生物学机制。 　　 　　1　实验材料及方法 　　 　　1.1　实验动物及分组　将肥胖建模成功SD大鼠46只按照体重级别分为8个等级，然后从每个等级随机抽取一只大鼠分笼，每笼8只分为即刻组(EO)、1h组(E1)、3h组(E3)、12h组(E12)和24h组(E24)，最后一笼6只作为对照组(C)。这样可以尽量保证各组大鼠在实验前体重上没有明显差异。 　　 　　1.2　实验对象运动方式　运动方式：大鼠专用电动跑台，坡度5％，速度20m／min，运动时间40 min。在正式跑台运动取材前，大鼠适应性训练3d，1次／d，每次20min,让大鼠能够适应跑台训练以完成实验。第四天严格按照训练计划进行正式训练，跑台结束后正常进食和饮水。 　　 　　1.3　测试样本的采集与处理　即刻组(EO)：大鼠在运动完以后立即2％戊巴比妥钠0.25 mL／100g行腹腔麻醉。用10mL注射器腹主动脉抽血，然后取2mL注入含置有10％EDTA-Na2(30μL)和抑肽酶(40μL)一次性试管混匀。4℃离心(4000r／min)15min，分离血浆至1.5mLEP管，-20℃以下保存待测，用于RIA；余血注入10 mL的一次性离心管，室温下静置2h，3000 r／min共20min离心，分离血清，-20℃保存待测；将大鼠沿颅骨正中剪开，暴露大鼠全脑并剥脱大鼠下丘脑，将大鼠下丘脑沿正中线纵向切开，左边一半用锡纸包好冻存-70℃用于RT-FCR；右边一半在煮沸的生理盐水煮5min，滤纸吸干，分析天平称重，加1 mol／LHCI0.5mL制成匀浆，室温下静置100rain，然后加1mol／LNaOH 0.5mL中和，4℃离心4000r／min，15min，取上清液保存-20℃用于RIA。 　　1h组(E1)：大鼠在运动完以后1h宰杀，取材步骤同上。 　　3h组(E3)：大鼠在运动完以后3h宰杀，取材步骤同上。 　　12h组(E12)：大鼠在运动完以后12h宰杀，取材步骤同上。 　　24h组(E24)：大鼠在运动完以后24h宰杀，取材步骤同上。 　　对照组(C)：鼠笼静养直接宰杀，取材步骤同上。 　　 　　 　　1.4　指标测试与方法 　　1.4.1　一般情况　运动完以后观察大鼠进食情况，精神状态等。对一次性运动组和肥胖对照组大鼠同时给予一定量的饲料，在各运动组大鼠宰杀前同时称重运动组大鼠和对照组大鼠剩余饲料，计算大鼠在运动后至宰杀前一段时间的进食量，并与对照组大鼠进食量进行比较。 　　1.4.2　血清学指标　测试大鼠一次性运动后不同时间段血糖、血脂、血胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的变化，以探讨一次性运动肥胖大鼠在不同时间段血清学指标变化情况。血清学指标采用全自动生化分析仪检测。 　　1.4.3　血浆和下丘脑NPY的测试方法 采用放射免疫学(RIA)方法测试，NPY试剂盒购于上海第二军医大学神经生物学教研室，所有测试由上海第二军医大学神经生物学放免实验室完成。RIA实验严格按照说明书操作步骤进行操作。NPY试剂盒灵敏度＜5 pg／tube，可测范围2.5-1280pg/tube，批内CV＜10％，批间CV＜10％。 　　下丘脑NPY mRNA的测试方法：基因表达采用半定量RT-PCR方式测试。Trizol和逆转录酶：美国invitrogen公司；ExTaq酶：日本Takara