骨髓间充质干细胞骨基质明胶复合体修复大鼠桡骨缺损放射学研究.docVIP

骨髓间充质干细胞骨基质明胶复合体修复大鼠桡骨缺损放射学研究 　　【摘要】 目的 构建骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体修复大鼠桡骨节段骨缺损,为骨组织工程中制备组织化骨提供理论依据。方法 制备成MSCs/BMG复合体和桡骨缺损模型。实验组为A组:MSCs/BMG组;对照组:B组:BMG组;C组:MSCs 1×10?6/ml组。每组都设置2、4、8、12周四个时间点进行取材。观察术肢X射线放射学、免疫组织化学等检测骨缺损的修复情况。结果 X射线放射学评分4、8、12周各组均有明显差异(P 　　【关键词】 　　MSCs/BMG复合体;桡骨缺损;X射线放射学 　　 　　The radiology research of MSCs/BMG complexrepairsegementaldefectinrats 　　CHEN Guo-dong,WANG Yan.Department of Radiology,the Central Hospital of Liaohe Oil Field,Panjin 124000,Liao Ning,China 　　 　　【Abstract】 Objective MSCs/BMG composite repair the segmental radial defect in rats with those composites.It may contribut to the development of bone tissue engineering.Methods Prepare MSCs/BMG composite and a bone defect(5 mminlength)was created at the both radial backbone in each rat.The experiment was divided into MSCs/BMG group(A group),BMG group(B group)MSCs group(C group).Morever,each group was subdivided into 4 time points:2,4,8and12weeks with 3 animals at each time point.The activity of operated limb was evaluate by gross observation,radiographic examination and histological analyses were performed to observe the bone defect repair after surgery.Results The X-ray radioactivity grades,4w,8w,and 12w:had the obvious difference with each group(P[1]预言有可能在一种合适的生物相容性材料上种植种子细胞并形成能被移植成骨的新组织。此后一些研究使用单纯的种子细胞和单纯的生物材料修复骨缺损,虽然取得了一定的成果,但是长期效果并不理想。直到1987年Bob Langer和Joseph Vacanti在其实验的基础上提出了组织工程学,这为修复骨缺损提供了一个新的思路。本实验将BMSCs与BMG复合培养构建组织化骨以修复大鼠桡骨节段性缺损,为骨组织工程进一步发展提供理论及实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及试剂 1月龄健康雄性SD大鼠10只(体质量120~140 g),用于分离培养MSCs;另取2月龄(体质量200~250 g)的SD大鼠72只,用于体内实验。动物由辽宁医学院实验动物中心提供。SD大鼠骨髓间充质干细胞,骨基质明胶,系在辽宁医学院完成。Ⅰ型胶原抗体由武汉博士德公司提供;低糖DMEM培养基由Gibco生物工程公司提供。胎牛血清由北京华美生物工程公司提供。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 松质骨骨基质明胶的制备 取牛股骨下端松植骨去除骨髓、软组织和关节软骨,用大量蒸馏水清洗,参照Urist[2]的BMG 制备方法制备牛松质骨BMG。冻干消毒保存备用。 　　1.2.2 种子细胞的获取 ①大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养:取4周龄,体质量在120~140 g的SD大鼠,100 g/L水合氯醛麻醉,750 ml/L乙醇浸泡20 min,无菌条件下取出两侧肱骨和股骨,刮除软组织、骨膜和干骺端的软骨部分,剪去骨骺端,参照Jun Yao[3]的实验方法进行原代培养;②骨髓间充质干细胞的标记:取第3代72 h MSCs,吸除旧培养液,用PBS冲洗2次,加入Brd-U终浓度为10 μmol/L的完全L-DM