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卫生微生物检测方法2016
* 常见粪便污染指示菌 1.大肠菌群(coliform group) 概念:指一群需氧的或兼性厌氧的,在35-37℃24h培养能分解乳糖产酸产气的G-无芽孢杆菌。 种类:大肠埃希菌属、枸橼酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯菌属、沙雷菌属、变形杆菌属某些种等。 卫生学意义 评价检样卫生质量,推断有无肠道致病菌污染。 总大肠菌群(total coliform)—37℃培养生长的大肠菌群。 粪大肠菌群(fecal coliform)(耐热大肠菌群)—44-45℃能发酵乳糖的大肠菌群。 方法:发酵法,滤膜法,纸片法 * 大肠菌群作为指示菌的一些新问题 大肠菌群“受损”对细菌计数的影响 大肠埃希菌的致病性 大肠菌群中某些细菌可以在外界繁殖 大肠菌群的检测范围有限 水中大肠菌群 200 cfu/100ml 小肠结肠炎耶尔森菌阳性率 6.4% 水中大肠菌群 200 cfu/100ml 小肠结肠炎耶尔森菌阳性率 8.9% * 2 大肠埃希菌(Escherichae coli) 检出意义最大 鉴定方法较复杂 药品行业使用较多 近年应用较多 作为粪便污染指示菌,大肠埃希菌检出意义最大,其次是耐热大肠菌群,总大肠菌群再次 * 3.肠球菌(Enterococcus)(粪链球菌) 人及动物肠道正常菌群。在人粪数量仅次于大肠菌群细菌,动物粪便中所占比例高。 对恶劣环境抵抗力较强,营养水体繁殖力低于大肠菌群。 单独检查不能作为粪便污染的决定性指标,但可提供有价值的补充材料。 判断污染来源。 方法: 耐热大肠菌群与肠球菌之比>4.1 污染来源人 耐热大肠菌群与肠球菌之比<0.7 污染来源动物 耐热大肠菌群与肠球菌之比4.1~0.7 混合来源 * 4 产气荚膜梭菌(Costirdia) G+有芽孢,还原亚硫酸盐的厌氧杆菌。 外界环境抵抗力较强。 不适合作为主要指标,但可提供有价值的补充材料。 特别适合水样不能及时送检,或在含有有毒物质(氯)的环境中检测是否有过粪便污染。 产气荚膜梭菌(+) 大肠菌群(+) 新近污染 产气荚膜梭菌(+) 大肠菌群(-) 陈旧污染 * 常见空气污染指示菌: 口腔和鼻腔的链球菌(无人居住的房屋空气中没 有链球菌,房屋内住人越多,链球菌的含量亦越 高)。一般用草绿色链球菌与溶血性链球菌合起 来计算。 * (三)不得检出的致病菌 微生物 主要危害 主要指示作用 沙门菌 肠道致病菌 口服药、食品不得检出 志贺菌 菌痢 食品不得检出 金葡菌 局部化脓、食物中毒 食品、化妆品、外用药不得检出;游泳池水指标菌 铜绿假单胞菌 条件致病菌 外伤、眼科用药、化妆品不得检出,游泳池水指标菌 破伤风梭菌 外伤皮肤感染 外用药不得检出 * (四)间接反映致病微生物存在的指示菌 肠道病毒指示微生物的条件: 检验方法简单 操作安全 在被人肠道病毒污染的环境中一定存在,数量等于或大于肠道病毒的数目 对于消毒剂和外环境的抵抗力应与肠道病毒一致或稍强。 * 肠道病毒的指示微生物 指示物 优点 缺点 应用 大肠杆菌噬菌体f2 与肠道病毒耐受性相似;存在于人粪中;检测较简便 粪便中数量少;可能在环境中繁殖;检测结果受大肠杆菌DNA噬菌体影响 水中病毒消毒效果评价指标 脊髓灰质炎病毒减毒疫苗株Ⅰ 操作安全 非所有粪便有;检测困难 应用于消毒学和水中病毒研究 * 第三节卫生微生物研究和检测的方法 (一)样品的处理 (二)损伤菌的复苏 (三)选择性增菌与分离 (四)定量计数方法 (五)分型鉴定的方法 (六)其他分子生物学方法 * 混匀样品(非常重要) 液体:电动混匀、手摇混匀、敲打混匀 固体:搅碎混匀、研磨混匀、匀浆混匀 样品浓缩 沉淀法 过滤法 吸附沉淀法 一、样品的处理 * 环境样品微生物,在采样送检等过程中,受各种不利因素作用,可发生亚致死性损伤。用普通培养方法不容易培养。需预先进行复苏(resuscitation)或修复(repair)才能培养。 无选择压力的培养环境 较低的培养温度 二、损伤菌的复苏 * 检测的困难:微生物小、少、混合。 选择方法:抑制其它微生物生长、促进目标微生物生长 物理方法:厌氧条件培养厌氧菌、光照条件培养藻类等 化学方法:根据微生物的营养需求,加入特制的促进或抑制生长的物质 三、对目的菌的选择性增菌与分离 * 四、微生物定量计数法 计数 直接(显微镜直接计数、比浊法) 间接 (使菌繁殖) 倾注平板法 表面涂布法 MPN法 “单个菌” “菌落”计数 统计学方法 * (一)倾注平板法 10倍梯度准确稀释待测样品,准确将稀释物定量均匀地倾注到琼脂培养基中,培养后计数菌落。 (二)表面涂布法 将样品定量涂布在琼脂培养基的表面,培养后,计数表面生
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