卫生微生物检测方法2016.ppt

* 常见粪便污染指示菌 1.大肠菌群（coliform group） 概念：指一群需氧的或兼性厌氧的，在35-37℃24h培养能分解乳糖产酸产气的G-无芽孢杆菌。 种类：大肠埃希菌属、枸橼酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯菌属、沙雷菌属、变形杆菌属某些种等。 卫生学意义 评价检样卫生质量，推断有无肠道致病菌污染。 总大肠菌群（total coliform）—37℃培养生长的大肠菌群。 粪大肠菌群（fecal coliform）（耐热大肠菌群）—44-45℃能发酵乳糖的大肠菌群。 方法：发酵法，滤膜法，纸片法 * 大肠菌群作为指示菌的一些新问题 大肠菌群“受损”对细菌计数的影响 大肠埃希菌的致病性 大肠菌群中某些细菌可以在外界繁殖 大肠菌群的检测范围有限 水中大肠菌群 200 cfu/100ml 小肠结肠炎耶尔森菌阳性率 6.4% 水中大肠菌群 200 cfu/100ml 小肠结肠炎耶尔森菌阳性率 8.9% * 2 大肠埃希菌(Escherichae coli) 检出意义最大 鉴定方法较复杂 药品行业使用较多 近年应用较多 作为粪便污染指示菌，大肠埃希菌检出意义最大，其次是耐热大肠菌群，总大肠菌群再次 * 3.肠球菌(Enterococcus)（粪链球菌) 人及动物肠道正常菌群。在人粪数量仅次于大肠菌群细菌，动物粪便中所占比例高。 对恶劣环境抵抗力较强，营养水体繁殖力低于大肠菌群。 单独检查不能作为粪便污染的决定性指标，但可提供有价值的补充材料。 判断污染来源。 方法： 耐热大肠菌群与肠球菌之比＞4.1 污染来源人 耐热大肠菌群与肠球菌之比＜0.7 污染来源动物 耐热大肠菌群与肠球菌之比4.1～0.7 混合来源 * 4 产气荚膜梭菌(Costirdia) G+有芽孢，还原亚硫酸盐的厌氧杆菌。 外界环境抵抗力较强。 不适合作为主要指标，但可提供有价值的补充材料。 特别适合水样不能及时送检，或在含有有毒物质（氯）的环境中检测是否有过粪便污染。 产气荚膜梭菌（＋） 大肠菌群（＋） 新近污染 产气荚膜梭菌（＋） 大肠菌群（－） 陈旧污染 * 常见空气污染指示菌： 口腔和鼻腔的链球菌（无人居住的房屋空气中没 有链球菌，房屋内住人越多，链球菌的含量亦越 高）。一般用草绿色链球菌与溶血性链球菌合起 来计算。 * （三）不得检出的致病菌 微生物 主要危害 主要指示作用 沙门菌 肠道致病菌 口服药、食品不得检出 志贺菌 菌痢 食品不得检出 金葡菌 局部化脓、食物中毒 食品、化妆品、外用药不得检出；游泳池水指标菌 铜绿假单胞菌 条件致病菌 外伤、眼科用药、化妆品不得检出，游泳池水指标菌 破伤风梭菌 外伤皮肤感染 外用药不得检出 * （四）间接反映致病微生物存在的指示菌 肠道病毒指示微生物的条件： 检验方法简单 操作安全 在被人肠道病毒污染的环境中一定存在，数量等于或大于肠道病毒的数目 对于消毒剂和外环境的抵抗力应与肠道病毒一致或稍强。 * 肠道病毒的指示微生物 指示物 优点 缺点 应用 大肠杆菌噬菌体f2 与肠道病毒耐受性相似；存在于人粪中；检测较简便 粪便中数量少；可能在环境中繁殖；检测结果受大肠杆菌DNA噬菌体影响 水中病毒消毒效果评价指标 脊髓灰质炎病毒减毒疫苗株Ⅰ 操作安全 非所有粪便有；检测困难 应用于消毒学和水中病毒研究 * 第三节卫生微生物研究和检测的方法 （一）样品的处理 （二）损伤菌的复苏 （三）选择性增菌与分离 （四）定量计数方法 （五）分型鉴定的方法 （六）其他分子生物学方法 * 混匀样品（非常重要） 液体：电动混匀、手摇混匀、敲打混匀 固体：搅碎混匀、研磨混匀、匀浆混匀 样品浓缩 沉淀法 过滤法 吸附沉淀法 一、样品的处理 * 环境样品微生物，在采样送检等过程中，受各种不利因素作用，可发生亚致死性损伤。用普通培养方法不容易培养。需预先进行复苏（resuscitation）或修复（repair）才能培养。 无选择压力的培养环境 较低的培养温度 二、损伤菌的复苏 * 检测的困难：微生物小、少、混合。 选择方法：抑制其它微生物生长、促进目标微生物生长 物理方法：厌氧条件培养厌氧菌、光照条件培养藻类等 化学方法：根据微生物的营养需求，加入特制的促进或抑制生长的物质 三、对目的菌的选择性增菌与分离 * 四、微生物定量计数法 计数 直接（显微镜直接计数、比浊法） 间接 （使菌繁殖） 倾注平板法 表面涂布法 MPN法 “单个菌” “菌落”计数 统计学方法 * （一）倾注平板法 10倍梯度准确稀释待测样品，准确将稀释物定量均匀地倾注到琼脂培养基中，培养后计数菌落。 （二）表面涂布法 将样品定量涂布在琼脂培养基的表面，培养后，计数表面生