新型组蛋白去乙酰的化酶抑制剂tcct对u和a细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响副本.doc

新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂TCCT对U251和A549细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响 - 副本 AbstractIV 引 言. 1 第一部分 TCCT 对 U251 与 A549 细胞增殖的 影响8 1 材料、仪器与试剂 8 1.1 癌细胞与药物. 8 1.2 主要试剂8 1.3 主要仪器设备. 8 1.4 主要工作液配制 9 1.4.1 TCCT 药物母液. 9 1.4.2 磷酸盐缓冲液PBS 9 1.4.3 双抗储存液1000×. 9 1.4.4 冻存液 9 1.4.5 MTT 溶液. 9 2 实验方法. 10 2.1 细胞培养 10 2.2 细胞种板 10 2.3 细胞加药 10 2.4 细胞活性测定及显微镜拍照 11 2.5 统计学 处理 11 3 结果 11 3.1 MTT 11 3.2 镜下观察. 14 4 讨论 16 第二部分 TCCT 对 U251 与 A549 及细胞周期 相关因子 mRNA 表达的影响18 1 材料、仪器与试剂. 18 1.1 癌细胞与药物18 1.2 主要试剂 18广东 药学 院硕 士研 究生 学位 论文 1.3 主要仪器设备18 2 实验方法. 19 2.1 细胞培养 19 2.2 细胞种板 19 2.3 细胞加药 19 2.4 RNA 提取 20 2.5 RNA 浓度及纯度检测20 2.6 RT-PCR 20 2.6.1 引物设计 20 2.6.2 构建 PT-PCR 反应体系及反应程式 ,RT-PCR. 21 2.6.3 琼脂糖凝胶电泳检测 RT-PCR 产物 22 3 结果 22 4 讨论 23 第三部分 TCCT 对 U251 与 A549 细胞周期的 影响 25 1 材料、仪器与试剂. 25 1.1 癌细胞与药物25 1.2 主要试剂 25 1.3 主要仪器设备25 2 实验方法. 26 2.1 细胞培养 26 2.2 细胞种板 26 2.3 细胞加药 26 2.4 细胞固定 27 2.5 PI 单染及上机检测 27 2.6 统计学处理 27 3 结果 27 4 讨论. 34 第四部分 TCCT 对 U251 与 A549 细胞凋亡的 影响 35 1 材料、仪器与试剂. 35广东 药学 院硕 士研 究生 学位 论文 1.1 癌细胞与药物35 1.2 主要试剂 35 1.3 主要仪器设备35 2 实验方法. 36 2.1 细胞培养. 36 2.2 细胞种板 36 2.3 细胞加药 36 2.4 细胞前处理及上机. 37 2.5 统计学处理 37 3 结果 37 4 讨论 42 第五部分 TCCT 对 U251 组蛋白乙酰化状态 及细胞周期相关因子蛋白表达的影响. 43 1 材料、仪器与试剂. 43 1.1 癌细胞与药物43 1.2 主要试剂 43 1.3 主要仪器设备44 1.4 主要工作液配制. 44 1.4.1 1.0M Tris-HCl (pH6.8 ) 44 1.4.2 1.5M Tris-HCl (pH8.8 ) 44 1.4.3 30% 储备胶溶液44 1.4.4 10% 十二烷基硫酸钠SDS 溶液. 44 1.4.5 10% 过硫酸铵AP 溶液 45 1.4.6 5×SDS电泳缓冲液. 45 1.4.7 15% 分离胶配方45 1.4.8 5% 浓缩胶配制. 45 1.4.9 10 ×转移缓冲液. 45 1.4.10 20% 吐温Tween20 溶液. 46 1.4.11 TBST 缓冲液. 46广东 药学 院硕 士研 究生 学位 论文 1.4.12 封闭液5% 脱脂奶粉 46 2 实验方法. 46 2.1 细胞培养 46 2.2 细胞种板 46 2.3 细胞加药 46 2.4 蛋白提取与定量. 47 2.4.1 蛋白提取 47 2.4.2 蛋白定量 47 2.5 Western Blot47 2.5.1 灌制 SDS凝胶 47 2.5.2 加样及电泳47 2.5.3 转膜. 48 2.5.4 封闭及抗体孵育 48 2.5.5 发光、曝光及显影48 3 结果 49 4 讨论 49 结 论51 参考文献 52 攻读学位期间发表的论文 56 附录 缩略词表57 致 谢58 广东 药学 院硕 士研 究生 学位 论文 新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂 TCCT 对 U251 和 A549 细 胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响 中文 摘要组蛋白乙酰化修饰是表 观遗传学重要 的 组成部分,主要 由 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 histon