第一章 细胞培养的设施与基本条件PPT.ppt

复习细胞工程概念;课前思考？;细胞工程实验室设计 原则 防止微生物污染和有害因素影响 要求 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘 划分不同功能区或用铝合金隔板隔开 无菌操作区应在室内较少走动的内侧 清洗和消毒安置在另室;Chapter 1 细胞培养的设施与基本条件;第一节 细胞工程实验室的设置 ;1．储藏室 主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。 还用来储藏什么？ 要求：取放方便。还有什么要求？;2.清洗和消毒灭菌室 清洁和消毒灭菌室应与其他区域分开，主要进行所有实验动物材料的处理、细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。 应满足哪些要求？;3．制备室 在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。 应具备什么要求？;4.无菌操作室 相对密封、防尘、防菌的工作空间，在结构和消毒方面都有具体要求。 更衣室： 缓冲间 无菌操作室;a 更衣室:供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。要求 b 缓冲间:位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。 c 无菌操作室:专用于无菌操作。;5.培养与观察室 本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。;二、 植物细胞培养室的设置;◆ 温度：一般控制在25±2oC ◆ 光照：光强、光质、光照时间;清洗室: 制备室： 灭菌室： 接种室： 培养室： 鉴定室： 驯化移栽室： ;;; 细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即： ?实验准备室； ?无菌操作室； ?控制培养室。; 消毒和实验前的准备 两间房 实验后污物处理和清洗 ? ; ①水槽两处：实验后的清洗及清洁液浸后的清洗。 ②盛清洁液的陶瓷缸或玻璃缸。 ③清洗后器皿的凉干架和贮存柜。 ④高温干燥消毒箱和高压蒸汽消毒锅。 ⑤消毒后器皿的凉干架和贮存柜。 ⑥重蒸水装置。 ⑦电炉 ⑧工作台 ⑨污物桶 ;B、无菌操作室 ;C、培养室;培养室内的无菌操作要点 ①紫外灯无人时就要打开； ②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩； ③每周清洗消毒一次； ④所用物品要以外科手术方式严格消毒； ⑤室内台面要要保持洁净； ⑥所用物品要一次性准备好； ⑦瓶口要用酒精火焰消毒； ⑧尽量减少出入。 ;从总体上来分，实验室主要分为两类： ?基本实验室： ?辅助实验室：;我系细胞工程实验所涉及的实验室现状;课后作业;第二节 常用仪器与设备 ;一、动物与植物细胞工程实验室通用的仪器设备;;;4.超净工作台（净化台）; ④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流型不受干扰。 ⑤一般情况下，高效过滤器三年更换一次。更换高效滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。要定期将粗过滤器中的过布（无纺布）拆下清洗，时间应根据环境洁净程度而定，通常间隔3~6个月进行一次。 ⑥每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品，并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。;?分类;?使用超净工作台应注意的几点问题;5.显微镜 ;6.电热干燥箱 ;7.纯水设备 ;8.冰箱 ;9.蒸汽消毒器 ;10.过滤除菌 ;;11.磁力搅拌器;12.电子天平;13.pH计;14.移液设备;;其它杂品 ①洒精灯，②煮沸锅，③铝饭盒，④胶塞，⑤胶帽。 ⑥小推车 ⑦ 微波炉 ⑧水浴锅 ;二.动物细胞工程实验室基本设备仪器;;第三节 实验室的生物安全 ; 根据密封程度的不同,将生物安全分为四个等级,即: P1、P2、P3、P4 一级生物安全标准，其基本要求是： 1、限制随便出入实验室； 2、操作前后要消毒； 3、不能用口吸取液体； 4、禁止在室内进食、吸烟和存放食品； 5、操作时着专门实验服； 6、处理细胞前后要洗手； 7、操作时在超净工作台。;;;作业