免疫学课件免疫血清学技术.ppt

第13章 免疫学技术概论 重点 免疫学技术类型 影响免疫血清学反应的因素 第1节 免疫血清学技术概述 免疫血清学技术类型：凝集试验、沉淀试验、标记抗体技术（免疫荧光抗体技术、免疫酶标记技术、放射免疫测定）、中和试验等 血清学反应的一般特点 特异性和交叉性 抗原与抗体结合机理 血清学反应的影响因素：电解质、温度、酸碱度 带现象：前带 后带 第2节 细胞免疫检测技术 检测机体血液中的T细胞数量 E玫瑰花环试验 T细胞酸性α醋酸萘酯酶测定 检测机体血液中T细胞转化功能 淋巴细胞转化试验 巨噬细胞移动抑制试验 T细胞活化试验 第3节 血清学技术的应用及发展趋势 疫病诊断 动植物生理活性物质研究 物种及微生物鉴定 动植物形状的免疫标记 生物制品研究 致病机理研究 分子生物学研究 发展趋势 第14章 凝聚性试验 第1节 凝集试验 直接凝集试验：颗粒性抗原 间接凝集试验：间接血凝实验、乳胶凝集试验、炭素凝集试验 直接凝集试验：颗粒性抗原 基本原理： 电解质 颗粒性抗原 + 相应抗血清 抗原颗粒凝集 (细菌、红细胞) 比例适合 凝集原 凝集素 过多 前带现象 （稀释血清） 方法：玻片法、试管法、微量法 间接凝集试验：基本原理 可溶性抗原（或抗体）+惰性载体（聚苯乙烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等） 抗原（或抗体）致敏载体 抗原（抗体）致敏载体+相应抗体（或抗原） 被动载体凝集（间接乳胶凝集、间接炭素凝集、间接红细胞凝集等 ） 第2节 沉淀实验 电解质 可溶性抗原 +免疫血清 出现沉淀现象 (血清蛋白、病毒) （抗体） 比例适合 沉淀原 沉淀素 比例不适合 不出现沉淀现象 容易过多 后带现象 （稀释） 环状沉淀试验 双向单扩散（辐射扩散） 双向双扩散 免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 环状沉淀试验 原理：小试管内，下层沉 淀素与上层沉淀原 在界面应，形成白 色沉淀环。 用途：检测皮毛中的炭疽 杆菌抗原（Ascoli试验） 免疫荧光抗体技术 原理： 异硫氰酸荧光素（FITC） 原理：荧光素（F）+ Ab AbF(FITC) AbF + Ag Ag- AbF 紫外光 Ag- AbF 标记抗体的制备：抗原?免疫动物? 抗体?提取IgG?标记?标记抗体的提纯?标记抗体的鉴定 荧光抗体染色：标本制备?染色（直接法、间接发） 应用：用AbF检测抗原 （定性、定位） 特点：敏感，需荧光显微镜 免疫酶标记技术 原理： 常用标记酶：辣根过氧化物酶（HRP） 酶标抗体的制备：抗原?免疫动物? 抗体?提取IgG?标记（戊二醛法、过碘酸钠法）?标记抗体的提纯?标记抗体的鉴定 常用免疫酶技术：免疫酶组织化学染色技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA） 应用： 放射免疫分析 原理：竞争性RIA 固相夹心RIA Ag*(F)+Ab? Ag*-Ab(B) + Ag ? Ag-Ab 标记用同位素：3H、12