色素上皮衍生因子对小鼠肾透明细胞癌模型抑制研究.docVIP

色素上皮衍生因子对小鼠肾透明细胞癌模型抑制研究 　　[摘要] 目的 研究重组人色素上皮衍生因子（rPEDF）在体内抑制肾透明细胞癌组织血管生成从而抑制肿瘤生长。方法 肾透明细胞癌细胞株786-0以浓度为5×106/100 μL在裸鼠左腋部背侧皮下注射，建立皮下移植瘤模型，分为两组（每组6只）：对照组（药物用PBS代替），1 μg/200 μL rPEDF治疗组，每日1次，连续注射2周。测量肿瘤大小，肿瘤组织行HE染色和免疫组织化学方法检测CD34标记的微血管。 结果 PBS对照组与rPEDF治疗组移植瘤平均体积分别为（1672.23±65.28）mm3和（1202.44±56.34）mm3，抑瘤率为28%，两组比较差异有显著性（P = 0.034）。PBS对照组与rPEDF治疗组小鼠移植肾透明细胞癌组织中微血管密度（MVD）平均为（72.83±12.34）和（25.67±8.56）/高倍镜视野，治疗组小鼠移植肾透明细胞癌组织中MVD减少65%，两组比较差异具有显著性（P = 0.006）。 结论 rPEDF治疗组小鼠移植瘤微血管密度明显减低，移植瘤的体积也相应减低，提示rPEDF能抑制血管新生，减缓肾透明细胞癌生长。 　　[关键词] 肾癌；裸鼠；色素上皮衍生因子；血管生成 　　[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）23-0010-02 　　肿瘤的生长依赖肿瘤血管的生成，抑制肿瘤血管的生成，能切断肿瘤生长的营养供应途径，阻断肿瘤血运侵袭转移途径，从而有效遏制肿瘤的生长转移，是治疗肿瘤的有效方法。PEDF能抑制血管内皮细胞的增殖和迁移，抑制血管管状形成；体内移植瘤模型实验结果表明，PEDF有效抑制新生血管的形成，并能抑制肿瘤的生长和转移。在前期研究工作中，我们发现肾透明细胞癌组织PEDF的表达与肿瘤微血管密度成反比[1]，是否应用重组人色素上皮衍生因子（rPEDF）在体内抑制肾透明细胞癌组织血管生成，导致肿瘤萎缩？在前期的研究结果基础之上，我们采用皮下接种的方法建立裸鼠的肾透明细胞癌模型，经过rPEDF的治疗，测定两种方法的抑瘤率，采用免疫组化方法检测肾透明细胞癌模型微血管密度的变化，从而判定rPEDF对肾透明细胞癌血管生成及肿瘤生长的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料及分组处理 　　1.2 肿瘤微血管密度计数 　　MVD 检测方法按Weidner[2]等法???CD34定位于血管内皮细胞胞浆，呈棕黄色。先在低倍镜（4×10）下观察整个切片，选取血管内皮细胞染色清晰，背景对比良好、微血管数量最密集的视野，再在高倍镜（20×10）下观察每单位面积（0.723 mm2）组织内CD34单克隆抗体标记的微血管（MV）数。结果以5个高倍（20×10）视野MV数的均数表示。 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS15.0软件进行分析，肿瘤体积和微血管密度均为连续计量资料，采用t检验，P 　　1999年 Dawson[10]发现了PEDF能有效抑制血管的新生，是目前最强的内源性血管生成抑制因子，其抑制血管新生的能力是血管抑素的2倍，是内皮抑素的7倍。Abramson等[11]报道PEDF能有效抑制Wilms瘤的生长，正常肾小管上皮细胞中PEDF表达量明显高于Wilms瘤中PEDF表达，由于PEDF的低表达降低了抑制肾Wilms瘤中血管新生的能力，从而导致Wilms瘤的血管密度增加，rPEDF可抑制Wilms瘤的生长。 　　我们曾报道[1]，肾透明细胞癌的PEDF表达与肿瘤MVD呈负相关，PEDF表达阳性者生存时间长于PEDF表达阴性者。为了研究rPEDF对动物移植肾透明细胞癌是否有相同的作用，我们建立小鼠的肾透明细胞癌动物模型，采用rPEDF瘤内注射组及PBS瘤内注射组。我们通过CD34来标记肿瘤新生微血管，通过检测小鼠移植肾透明细胞癌的微血管密度来确定rPEDF对肾透明细胞癌血管新生是否有影响，我们的结果表明rPEDF瘤内注射组的肿瘤微血管密度明显低于PBS注射组，另外我们还发现rPEDF治疗组的肿瘤在接受2周的rPEDF移植瘤瘤内注射后，移植瘤的直径明显小于只接受PBS注射的对照组，PEDF对肾透明细胞癌新生血管的抑制可有效抑制肾透明细胞癌增殖生长。虽然接受rPEDF瘤内注射后肿瘤微血管密度下降程度大于肿瘤体积的下降程度，考虑肾透明细胞癌组织具有丰富的微血管，降低部分血管密度，肿瘤组织仍可靠周围的细胞进行营养弥散扩张，只有明显降低微血管，才能减慢肿瘤生长。 　　国外研究表明[12]，rPEDF选择性抑制新生血管的生长，不能抑制本身已经存在的血管，另外研究[13]表明PEDF只对血管内皮细胞有抑制作用，rPEDF不能抑制成纤维细胞及平滑肌细胞，基