胞外核苷酸抗食管癌eca109和肝癌smmc7721细胞增殖及其分子机制的研究-study on the anti-proliferation and molecular mechanism of extracellular nucleotides in esophageal carcinoma eca 109 and hepatocarcinoma smmc 7721 cells.docx

中文摘要ADO几乎无此作用。Wen等发现ATP对肝细胞癌¨一7A细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用，该作用是ATP降解为ADO并通过激动A3受体而发挥的。食管鳞癌细胞株Eca—l09和肝癌细胞株sMMc．7721系来源于我国癌症病人的肿瘤细胞株，目前尚未见ATP对这两株肿瘤细胞的研究报道，本文以上述两株肿瘤细胞作用研究对象，观察了ATP对其的增殖抑制及诱导凋亡作用，同时观察了P2受体亚型mRNA在食管癌Eca．109细胞中的表达，以探讨ATP抑制肿瘤细胞生长的分子机制。第一部分三磷酸腺苷对食管癌Eca．109和肝癌SMMC．7721细胞增殖的影响本研究观察了三磷酸腺苷(ATP)对人食管癌细胞株Eca．109和人肝癌细胞株SMMC．7721细胞增殖的影响。采用MTT法测定ATP和腺苷(ADO)抑制肿瘤细胞增殖的作用，流式细胞术观察ATP对细胞周期时相分布的影响，wrights—Giemsa染色观察细胞形态学的改变。1ATP和ADo对Eca．109细胞株增殖的影响与阴性对照组相比，ATPO．03～0’3mm01-L叫处理细胞48、72、96h后，AD0O．3mm01·L。处理48h以及()．1～O|3mmol-【．。处理72、96h后，均可显著抑制细胞增殖。0．3mmol·一的ATP和ADO分别处理细胞48、72、96h的抑制率依次为72．08％和18．54％(48h)、86_36％和21．08％(72h)、85．04％和29．88％(96h)，ADO的作用均明显弱于ATP。在O．03～O．3mm01．L．1范围内，两药的抑制作用均呈浓度依赖性。阳性对照组对细胞增殖有很强的抑制作用，顺铂(cDDP)25mg·一处理细胞48、72、96h的抑制率分别为87。16％、95。44％、97．92％。2ATP和ADO对SMMC．772l细胞株增殖的影响与阴性对照组相比，ATP0．3mm01-I。q处理细胞48h，O．1～O．3mmol-L一处理72、96h后，或AD0O．3mmol-L．J处理48、72h，0．1～0．3mm01．L一处理96h后，均可明显抑制细胞增殖。0．3mmol·Lq的ATP和AD0分别处理细胞48、72、96h的抑制率依次为45．79％和33．68％(48h)、71．28％和41．53％(72h)、82．06％和52．84％(96h)，ADO的作用均明显弱于ATP。在0．03～0_3mmol·L一范围内ATP的抑制作用呈浓度依赖性。但中文摘妥是，AO。在0.03mmolrl处理细胞48和96h后表现出轻度的促增植作用。阳性对照组对细胞增琐的抑制作用很强，CDOP25mgL-1处理制胞48、72、96h的抑制率分别为94.34%、98.94%、98.83%。3ATP对Eca嗣109细胞增殖周期的影响Eca-l09细胞经不同浓度A丁P处理72h后，增跑周期时相分布和增殖指数发生了改变:与对照相比较，ATP0.03mmo!-I_-J处理吉旦的0010，期细胞显著增加，s和O2届1期细胞均无明显改变，增殖指数显著降低;ATPO.3mmol-L-1处理组00/0，期细胞跟著增加，s期细胞显著减少，:t曾植指数显著降低:但0.1mmo!L-ATP处理细细胞增躏周期H才相分布和增殖指数均无明显变化。4ATP对SMMC-7721细胞增殖周期的影响0.03，mmol-L-1ATP分别处理SMMC-7721细胞72h后，句对照组比较，各处理组细胞的增础周期时相分布和增殖指数均无明显变化。5ATP对Eca-l09和SMMC-7721细胞形态的影响经ATP1.0mmo!.L-1处理72h后，部分SMMC-7721细胞出现胞质空梅、核阁缩、核边集、核破碎、核小体形成等细胞刑亡的特征:阴性对照组细胞数目较多，细胞体fJl较大，胞极大，核浆比例大，可见癌巨细胞，细胞增躏活跃，分裂相多。Eca-109细胞经ATP1.0mmo!L.J处理72h后，细胞数目较阴性对照组明显减少，但细胞惆亡的形恋特征不明显。以上结果表明，ATP对五印刷109和SMMι7721细胞均有增娟抑制作用。AT通过增加I00/01期细胞和减少S期细胞，产生较强的抗巳ca翩109细胞增殖作用，此作用主!要由ATP自身所蚁，代明才产物AOO也具有一定的作用。对于SMMC-7721细胞，ATP可能较大程度地通过降解为ADO而没挥抗增躏作用，此作用与细胞的增植周期无关，而可能与诱导细胞唰亡部分相关。第工部分三磷酸腺背对食管由Eca-l09和肝癌SMMC-7721细胞惆亡的影响细胞凋亡是目前许多药物抗肿瘤作用的机制之…，Bd-2相Bax蛋白是3重要的凋亡调节蛋白，参与了多种细胞的凋亡调控ω本部分实验采用3综述可能是通过GABA受体，3Q。还原型甾体如AP，3Q，受体的激动剂，大鼠GABA能神经