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银耳多糖分子修饰及抗氧化作用研究 　　摘要：用POCl3修饰酸水解银耳多糖所产生的单糖或低聚糖，并通过红外光谱分析，发现修饰后的产物含有磷酸基团；此外，通过邻苯三酚自氧化法，结合紫外光谱分析，对修饰前后产物的抗氧化性进行了比较研究，结果表明：在常温中性条件下，POCl3用量4%～5%，反应时间20～35min，旋转蒸发溶液只剩20～30mL时，可以使银耳多糖酸解出的产物充分磷酸化，且磷酸化修饰后产物的抗氧化作用有较明显的提高。 　　关键词：银耳多糖；酸水解；分子修饰；三氯氧磷；抗氧化 　　中图分类号 TQ464.1 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）17-17-03 　　分子修饰是通过化学、物理学及生物学等手段对化合物分子进行改造，以获得性能更加优良的结构类似衍生物的方法[1]。分子修饰可改变多糖的空间结构、分子量及取代基种类、数目和位置和生物活性，是多糖构效关系及其药物研究的有效手段；而构效关系研究结果又指导着多糖分子修饰的方向，可分析多糖结构和活性的关系，为其药物设计、研究和开发提供理论支持[2-3]。选择合适的方法对多糖进行分子修饰，可提高其生物活性或降低其毒副作用。为提高多糖活性，多糖分子修饰研究已有很大进展。将多糖或寡糖进行衍生化，如降解、硫酸化、磺酰化、乙酰化、烷基化等，对提高银耳多糖的水溶性、抗病毒活性或提高免疫力等功能具有良好的作用[4]。 　　银耳（Tremella fuciformis Berk），属菌类植物，素有“菌中之冠”美称，又名白木耳，是一种高等真菌，具有滋阴润肺、益气和血、补肾益精、强心健脑的功能。 　　银耳营养成分齐全，赖氨酸含量丰富，碳水化合物含量为65%～78.3%，其中银耳多糖就占了干重的60%以上，银耳多糖可提高机体的非特异性和特异性免疫功能，抑制肿瘤发生；银耳富含疏、磷、铁、镁、钾、钠及多种元素，对平衡人体代谢十分有益；银耳含脂类较少，且多为磷脂，因而对高血脂、高血压及动脉硬化患者有益；银耳中的粗纤维含量为2.4%～2.75%，对老年便秘患者相当有利；银耳还含有多种B族维生素，如硫胺素、核黄素等。 　　近年来，对银耳的化学成分及药理活性进行的许多研究和大量的现代药理证明，多数药理活性都与银耳多糖有关。从银耳子实体中分离到的多糖，相对分子质量1.15×105，由岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成，总糖含量为75.7%，含葡萄糖醛酸14.7%。 　　通常把较高分子量的多糖，降解成较低的分子量，能显著提高其活性。选择适当的降解方法，将多糖降解到适宜的分子量，至关重要。目前降解多糖的方法主要有酸降解、酶降解和超声波降解等[5]。 　　本实验对酸水解后的银耳单糖或低聚糖用POCl3[6]进行分子修饰，以期改变其分子结构，增加磷酸基功能团，达到提高生物活性的目的。 　　1 原理和方法 　　银耳多糖是活性多糖中的杂多糖，是大分子，可以先将银耳多糖降解成小分子物质，再进行分子改造。 　　1.1 银耳多糖的酸解 酸降解的依据是，酸性溶液能引起多糖中糖苷键的断裂，使多糖降解为低分子片段，控制酸浓度、温度及时间可获得不同分子量大小的降解产物。 　　1.2 银耳多糖酸解产品磷酸化反应机理 将银耳多糖降解，得到以甘露糖为主的单糖或者低聚糖，然后用POCl3在适当的pH、用量和反应时间下，充分和银耳多糖的降解产物发生反应，生成具有磷酸基团的新产物，从而提高降解物质的抗氧化活性，增加其用途。 　　1.3 银耳多糖酸解产品的制备 先粉碎银耳，称量50g银耳粉置于900mL的烧杯里；再称量800mL蒸馏水加入900mL烧杯中，搅拌溶解烧杯内的银耳粉；接着移取占蒸馏水量20%的浓HCl，混匀搅拌，盖上保鲜纸；然后立即水浴，设定80℃，2h水浴；取出后，立即用氢氧化纳固体中和溶液中的盐酸至pH为7；然后，将溶液过滤，弃渣取液，放入冰箱保存。 　　1.4 银耳多糖酸解产品改性实验方法 先在溶液中加入适量的活性炭，将液体煮沸，自然冷却，接着抽滤，使之脱色；取无色透明液体300mL，均分为3个250mL烧杯装，其中2个加入不同量的POCl3，按液体4%～5%取量，然后加入每个250mL烧杯中，让其反应20～35min；反应完后，用旋转蒸发器将每个小烧杯的水分蒸出，将每间隔一段时间蒸出的氯化钠结晶取出收集起来，另外烘干，取烧杯内的液体继续蒸，直至得到修饰后较纯产品，设定旋转蒸发的温度为70℃；将产物制成丸粒完全烘干或半烘干。 　　1.5 银耳多糖酸解产品改性前后分子结构的测定方法 采用红外光谱法，称取经过充分干燥的三氯氧磷化后的银耳多糖酸解产物10mg，KBr压片测定其红外光谱。从中分析修饰之后和修饰之前产物的基团差异，寻找磷酸基团的存在。 　　1.6