黄连须根浸提液对土壤微生物及酶活性影响.docVIP

黄连须根浸提液对土壤微生物及酶活性影响 　　[摘要] 黄连Coptis chinensis是大量使用的中药材，连作障碍严重。试验在供试土壤中加入不同浓度的黄连须根浸提液（REC），研究了它们对土壤微生物和酶活性的影响。结果表明，在加入REC的土壤中，微生物碳氮量显著降低，细菌和放线菌比对照降低约60%，但真菌增加3倍左右。自生固氮菌、磷细菌、钾细菌、硝化细菌和氨化细菌均显著减少，说明土壤固（供）氮、溶磷、解钾、促生等功能受到抑制。REC对土壤酶活性的影响表现出多样性，提高转化酶活性，降低脲酶活性，对脱氢酶活性无显著影响，妨碍了土壤生物化学反应的有序进行。此外，REC减少微生物标记性磷脂脂肪酸（PLFAs）种类，降低PLFAs总量，提高真菌/细菌PLFAs比值，说明REC在抑制细菌繁殖生长的同时，相对的增加了真菌数量，致使后续作物容易发生真菌病害。REC还显著降低土壤微生物群落的多样性和均匀度指数，说明加入REC恶化了土壤生态环境，使微生物种群减少，密度降低。因此，在黄连生长过程中，根系分泌的化感物质可能改变土壤微生物种群结构，造成连作障碍。 　　[关键词] 黄连；土壤；微生物；酶 　　黄连Coptis chinensis Franch属毛茛科多年生草本植物，具有清热燥湿，泻火解毒之功效，广泛用于肠道感染，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染等也有一定疗效，是传统的大宗道地中药材[1-2]。在黄连种植过程中，通过茎叶淋溶，根系分泌和植物残体腐解等多种途径向土壤中释放小檗碱（berberine）、黄连碱（coptisine）、巴马汀（palmatine）、药根碱（jatrorrhizine）、甲基黄连碱（worenine）和表小檗碱（epiberberine）、小檗红碱（berberrubine）等化感物质[3]。其中，以小檗碱的分泌量最高，可达总分泌物的80%以上[4]。种植黄连后的土壤必须间隔2～3年才能再次种植，连作障碍极其严重。 　　相对于棉花-小麦-棉花轮作，棉花连作使土壤微生物种群数减少36.5%，种群结构改变，多样性指数显著降低[5]；在牧草地和种植芒果的土壤中，微生物碳氮量和标记性磷脂脂肪酸总量显著高于菜地，各磷脂脂肪酸的含量也因种植作物不同而异[6]；集约化农业生产降低土壤有机质，微生物种群减少，合理轮作能提供丰富多样的有机质，满足不同微生物的营养需要，微生物活性与种群数显著高于单一种植[7]；在黄花蒿种植过程中，所释放的青蒿素对土壤某些细菌产生抑制作用，土壤微生物的多样性降低，种群结构改变[8]；在种植丹参的根际土壤中，氨化细菌、固氮细菌、有机/无机磷细菌等显著减少，但亚硝化细菌、硝化细菌、反硝化细菌等微生物种群显著增加。因此可见，种植植物对土壤微生物产生深刻影响。 　　目前，关于黄连根系分泌物对土壤微生物影响的研究甚少，导致对其连作障碍的成因认识不足。此外，微生物是土壤酶的重要来源，其活性及种群对土壤酶产生潜在影响，而土壤酶催化土壤生物化学反应，如氧化还原、有机质降解、硝化与反硝化、腐殖质合成等，故微生物活性、种群与土壤功能密切相关[8]。作者利用不同浓度的黄连须根浸提液，通过培养试验研究了它们对土壤微生物及酶活性的影响，为揭示黄连连作障碍发生机制积累了资料。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试样品 供试土壤为西南大学农场的中性紫色土，质地中壤、pH 6.68、有机质20.03 g?kg-1、全氮3.32 g?kg-1、有效磷16.43 mg?kg-1、速效钾119.8 mg?kg-1。采集0～20 cm耕作层，拣去杂物，风干，过1 mm 筛，取250 g土壤于500 mL塑料杯中备用。 　　供试黄连须根（fibrous root extracts of Coptis chinensis，REC）购自重庆市石柱县黄连有限公司，小檗碱50.20 mg?g-1，（80±1） ℃烘干，粉碎过2 mm筛。准确称取20.00 g，加1 L蒸馏水37 ℃浸泡72 h后抽滤，滤液用去离子水定容至1 L备用。 　　1.2 试验设计 考虑到1 g?L-1黄连根茎浸提液可抑制幼苗生长[4]，试验分别在供试土壤中加入0，6.25，9.375，12.5，25 mL黄连须根浸提液，即土壤中的黄连须根浸提液质量分数为0，500，750，1 000，2 000 mg?kg-1，相当于小檗碱质量分数为0，25，37.5，50，100 mg?kg-1，混合均匀。然后，加水至土壤最大田间持水量（24.29%）的（70±2）%，（25±1） ℃培养10 d。 　　1.3 测定项目 利用稀释平板分离计数法测定土壤中的细菌（牛肉膏蛋白胨培养基）、真菌（马丁氏培养基）、放线菌（高氏一号培养基），自生固氮菌（Ashby无氮培养基）、磷细菌（磷酸