口腔培养细胞的取材与分离.pptVIP

成骨细胞 形态学特点：不同培养方法所获得的成骨细胞形态各有差异 免疫组织化学染色特点：BGP、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶活性 功能：成骨作用 调节破骨细胞骨吸收作用 五、口腔肿瘤细胞 口腔鳞癌细胞 细胞系来源：鳞状细胞癌标本原代及传代培养 生物学特性： 多角形上皮样细胞 核/浆比例高，多核仁 高贴壁率，克隆形成率和软琼脂集落形成率 Cal27 cell 培养细胞的取材与分离 取材部位准确 严格无菌操作，避免微生物和化学污染 尽快培养，24h以内 减小损伤，使用锐器，避免撕扯 制备标本，以便鉴定 体外细胞的纯化 人工纯化：酶消化法、机械刮除法、反复贴壁法、克隆法、培养基限定法、流式细胞仪分离法 等 自然纯化 细胞冻存要点： 冷冻过程要缓慢 冻存细胞必须处在对数生长期 细胞复苏要点： 快速解冻 解冻后的细胞应离心去除冷冻保护剂后再接种到培养基中 细胞培养的污染、检测与控制 微生物污染：细菌，真菌，支原体等污染 污染的途径：空气 、器材 、操作 、试剂 、组织标本 微生物污染的检测 微生物污染的控制：抗生素除菌法；加温处理 细胞培养常用方法： 组织块培养法 酶消化法 第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点 一、牙齿相关细胞 牙髓细胞（ Dental pulp cells ） 培养方法：组织块法；酶消化法 细胞形态特点 免疫组织化学染色 体外培养细胞的生长增殖特点 功能特点 牙髓细胞 波形丝蛋白染色(+) 未分化间充质细胞 成纤维细胞 牙髓细胞 体外培养细胞的生长增殖（Cell proliferation in vitro） 生长增殖较快 传代期较短，15-20代 (2-4 M) 可复层生长 牙髓细胞 功能特点 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP)活性 矿化现象 (Von Kossa) 对细胞因子的反应 对盖髓剂的反应 牙髓细胞 培养方法：组织块培养法；酶消化法 细胞形态特点：成纤维细胞型（与牙周膜细胞类似） 免疫组织化学染色：波形丝蛋白（+）；角蛋白（-） 体外培养细胞的生长增殖特点 功能特点 牙周膜细胞（periodontal ligament cells） 培养方法：组织块法；酶消化法 细胞形态特点 免疫组织化学染色 体外培养细胞的生长增殖特点 功能特点 牙周膜细胞增殖分化的影响因素 原代 人牙周膜成纤维细胞 传代人牙周膜成纤维细胞 免疫组织化学染色 波形丝蛋白染色阳性 角蛋白染色阴性 牙周膜细胞 成纤维样细胞，培养成功率高 细胞增殖快 体外存活时间长 (4-12 M) 功能特点 分泌功能：胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶。 矿化功能 收缩功能 再生功能 根面吸附等 二、唾液腺细胞 细胞形态特点 腺泡上皮细胞：体外培养的腺泡细胞多呈“铺路石”样排列 导管上皮细胞：导管上皮细胞呈多边形 肌上皮细胞： 肌上皮细胞呈梭形或星形 唾液腺细胞 导管上皮细胞 HSG细胞系 HSG细胞系 A 小型猪腮腺上皮细胞原代培养（×10） B 小型猪腮腺上皮细胞alpha淀粉酶免疫组化染色（×10） 腺泡细胞上皮细胞 免疫组织化学染色 腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、 导管上皮膜、前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应 导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应 肌上皮细胞：肌动蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应 三、口腔黏膜细胞 口腔黏膜细胞 培养方法：组织块法和酶消化法 形态特点：卵圆形、多边形，呈“铺路石”样单层排列 免疫组织化学染色：波形丝蛋白阴性，角蛋白阳性 功能：分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白 兔口腔黏膜上皮细胞 A B A 无血清培养基培养条件下（×10） B 滋养细胞层培养条件下（×4） 四、颌骨相关的硬组织细胞 破骨细胞 形态学特点：多核巨细胞，体积大 组织化学染色：破骨细胞单克隆抗体呈阳性反应；降钙素反应呈蓝紫色；抗酒石酸磷酸酶反应呈棕褐色 功能：骨吸收功能 影响因素： 促进：破骨细胞激活因子、甲状旁腺素 抑制：γ-干扰素、降钙素