毛竹mariner-like转座子的转座特性分析-analysis on transposing characteristics of bamboo mariner - like transposon.docxVIP

独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在国家自然基金项目和浙江省自然科学基金杰出青年项目（LR12C16001）的资助下，在指导教师指导下，通过本人的工作努力取得的成果，并且是由本人自己撰写的。尽本人所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，本论文中不包含任何他人撰写或发表过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密，本学位论文属于不保密。□（请在方框内打“√”）学位论文作者亲笔签名：日期：指导教师亲笔签名：日期：摘要摘要转座子（transposon,Tn），又叫转座因子(transposableelement,TEs)、跳跃因子、可移动基因、跳跃基因，是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位，实质是在细胞中能从同一条染色体上的一个位点“跳”到另一个位点，或者从一条染色体转移到另一条染色体上的DNA序列。本研究将之前分离得到的两个具有完整转座酶结构的毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2和与之对应的非自主的转座子Phmar1NA和Phmar2NA构建到带有绿色荧光蛋白基因的植物表达载体pBINm-gfp5-ER上，然后通过农杆菌介导法对野生型拟南芥进行遗传转化。再对T1代植株进行筛选和鉴定。利用荧光观察和PCR扩增的方法，在确定的转基因植株中发现含有毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2的转基因植株出现了转座现象，而含有非自主转座子Phmar1NA和Phmar2NA的转基因植株则没有。结果表明了毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2是具有转活性的，并且可以在模式植物拟南芥中发生异源转座。再对转基因植株中Phmar1和Phmar2转座子的转座足迹和插入位点进行分析，发现两种转座子都会在转座过程中留下转座足迹，并且会转座到拟南芥基因组的其他位置。再用生物信息学软件对转座足迹序列进行分析，发现Phmar1和Phmar2转座子的剪切过程是不同，从而可以判断这两个转座子的转座特性不同。本研究是首次将竹亚科MLE转座子在拟南芥中进行异源转座，并成功分析了转座特性，为下一步构建高活性毛竹MLE转座子以及开发植物MLE转座子标签系统奠定了基础。关键词：毛竹，Mariner-like转座子，转座特性，拟南芥检测系统IABSTRACTTransposon(Tn),alsoknownasthetransposableelement(TE),skipfactor,mobilegene,jumpinggene,isthebasicunitexsitinginchromosomeswhichismoblieandabletoautonomousreplicate.Infact,TransposonsaredefinedasDNAsequencesthatareabletomovefromonelocationtoanotherinthegenome,orfromonechromosometoanother.Inthisstudy,twomariner-liketransposons(Phmar1andPhmar2)withfull-lengthtransposasefromPhyllostachyspubescens(edulis),andthenonautonomouspartners(Phmar1NAandPhmar2NA)werefusedtothevectorpBINm-gfp5-ERwhichcontainsgreenfluorescentproteingene,andthenthecomponentsweretransferredintotheArabidopsisthalianagenomeviaAgrobacteria-mediatedtransformation.TheT1oftransgenicA.thalianaplantswerescreenedandidentified.BythemethodsofFluorescenceobservationandPCR,transpositionactivitiesweredetectedinthetransgenicplantswithPhmar1andPhmar2but,bycontrast,notintheone