慢肾康宁对uuo大鼠肾间质纤维化中tgf-β1smad3信号调控的mir-21 mir-29表达的影响-effect of slow shen kang ning on mir - 21 mir - 29 expression regulated by tgf - β 1 smad 3 signal in renal interstitial fibrosis of uuo rats.docxVIP

中文摘要目的：观察中药复方慢肾康宁对UUO大鼠肾间质纤维化中TGF-β1/Smad3信号通路介导的miR-21、miR-29表达的影响。方法：60只成年雄性Wistar大鼠在适应性喂养1周后，按体重随机分为六组（n=10），分别为正常对照组(正常组)、假手术组、UUO模型组（模型组）、缬沙坦组、慢肾康宁高剂量组（MGH组）和慢肾康宁组（MG组）。模型组和各药物组予行UUO术造模，于左肾下极处结扎后离断输尿管；假手术组不结扎离断输尿管，仅游离输尿管后即关闭腹腔。术后3天连续腹腔注射青霉素用以预防感染。各组均于术前3天开始灌胃给药，缬沙坦组给予缬沙坦8mg·kg-1·d-1，MGH组给予慢肾康宁30g·kg-1·d-1，MG组给予慢肾康宁15g·kg-1·d-1，余各组予等量生理盐水灌胃，给药时间为2周。术后第12天处死大鼠，腹主动脉取血用于检测CREA和BUN；记录体重及双肾湿重；取左侧肾组织行HE染色和Masson染色，光镜下观察其病理改变；免疫组化方法检测左肾组织TGF-β1、p-Smad3蛋白表达情况；逆转录PCR方法检测左肾组织TGF-β1、Smad3、VimentinmRNA和miR-21、miR-29的表达情况。结果：HE染色显示，正常组及假手术组左肾组织结构正常；模型组左肾组织结构错乱，小管间隙增宽，内有大量炎性细胞浸润，Masson染色可见大量胶原纤维交织呈网状，间质纤维化严重；各药物组与模型组相比较，肾间质中炎性浸润及胶原面积减少，间质纤维化程度明显改善。各药物组肾重/体重值相比模型组均有不同程度的下降（P0.05)。造模组与假手术组相比，CREA及BUN值均有不同程度升高(P0.01)，各治疗组与模型组相比结果无统计学意义，但有下降趋势。免疫组化显示，各药物组相比模型组，TGF-β1、p-Smad3蛋白表达显著下降（P0.01)，MGH组与缬沙坦组优于MG组(P0.01)。Real-timePCR显示，各药物组相比模型组，TGF-β1、Smad3、VimentinmRNA和miR-21表达水平均有不同程度的下调（P0.05)，miR-29表达水平上调（P0.05)。结论：UUO大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号通路被激活；慢肾康宁能抑制UUO大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号通路，下调TGF-β1、Smad3、miR-21的表达，上调miR-29的表达；慢肾康宁能减轻肾间质纤维化，下调Vimentin的表达，这一过程可能是通过抑制TGF-β1/Smad3信号介导的miR-21、miR-29表达而实现的。关键词：慢肾康宁；肾间质纤维化；TGF-β1/Smad3信号通路；miR-21；miR-29IABSTRACTOBJECTIVE：ToobserveeffectsofManshenkangninggranules(MG)onthekidneytissueofUUOratsabouttheexpressionofTGF-β1,Smad3,miR-21andmiR-29.METHODS：60maleWistarratswererandomlydividedinto6groupsofequalsize(n=10):Group1(normalcontrolgroup):controlrats+placebo;Group2(shamoperationgroup):shamoperationrats+placebo;Group3(modelgroup):UUOoperationrats+placebo;Group4(Valsartangroup):UUOoperationrats+Valsartan(8mg·kg-1·d-1),Group5(highdoseMGgroup):UUOoperationrats+highdoseMG(30mg·kg-1·d-1);Group6(normaldoseMGgroup):UUOoperationrats+MG(15mg·kg-1·d-1).Normalcontrolgroupwasreceiveddistilledwaterbygavages.3daybeforeUUOoperation,allthetreatmentgroupswerereceivedmedicinebygavages,andthenormalcontrolgrouprats,shamoperationgroupratsandmodelgroupratswerereceiveddistilledwaterbygavages.Theratsweresacrificedafter12daysoftreatment,recordedweightsandbilateralkidneyswet