牵张应力对mc3t3 e1和人牙周膜细胞成骨分化的影响及相关信号通路调控作用研究-effects of tensile stress on osteogenic differentiation of mc 3t3a1 and human periodontal ligament cells and related signal pathway regulation.docxVIP

博 博 士 学 位 论 文 PDF PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 HYPERLINK / 1 材料与方法 64 2 实验结果 65 3 讨论 69 4 结论 74 总 结 86 个人简历和研究成果 错误！未定义书签。 第四军医大 第四军医大学博士学位论文 缩略语表 缩略词 ALP 英文全称 alkaline phosphatase 中文全称 碱性磷酸酶 COLⅠ Collagen, type Ⅰ Ⅰ型胶原 ERK1/2 Extracellular signal-regulated kinase 1/2 细胞外信号调节激酶 1/2 EGF Epidermal growth factor 表皮生长因子 IKK IκB kinase IκB 激酶 lL-6 MAPK Interleukin-6 Mitogen activated protein kinase 白介素-6 促分裂原活化蛋白激酶 MMP Matrix metalloproteinase 基质金属蛋白酶 NF-κB Nuclear factor kappa B 核因子 κB OCN osteocalcin 骨保护素 OPG Osteoprotegerin 白介素-6 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PGE2 PAGE Prostaglandin-E2 Polyacrylamide gel electrophoresis 前列腺素-E2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PDL periodontal ligament 牙周膜 PGE2 TGF Prostaglandin-E2 Transforming growth factor 前列腺素-E2 转化生长因子 TNF Tumor necrosis factor 肿瘤坏死因子 1 博 博 士 学 位 论 文 牵张应力对 MC3T3-E1 和人牙周膜细胞成骨分化 的影响及相关信号通路调控作用研究 中文摘要 应力刺激是调节骨代谢、维持骨量和骨功能结构的重要因素之一。应力 状态下的牙周组织改建是口腔正畸临床矫治的生物学基础，在机械应力刺 激下，通过对牙周膜细胞以及成骨细胞生物学功能的调节，最终实现正畸 牙齿的移动，同时维持牙槽骨组织应力改建的平衡。目前尽管人们对成骨 细胞及牙周膜细胞的力学生物反应进行了大量的研究，包括其增殖、分化， 功能状态、成骨或破骨相关细胞因子的表达，胞内信号转导通路等，但成 骨细胞或牙周膜细胞对应力刺激的识别机制、信号转导机制、生物响应机 制等还并不十分清楚，尤其是对其生物力学信号转导通路调节机制以及不 同信号通路之间相互作用及相互关系知之 甚少。细胞外信号调节激酶 (extracellular signal regulated kinase 1/2，ERK1/2)信号通路和核因子 κB ( Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路是细胞内应力信号转导过程中两条 重要的信号转导通路，在成骨前体细胞及牙周膜细胞成骨分化过程中发挥 着重要作用。因此本研究通过 MC3T3-E1 成骨样细胞以及人牙周膜细胞的 体 外 培养 ， 通 过 建 立 细胞 体 外牵张应力 加载模 型 ， 观察 牵张应力对 2 MC3T3-E1 成骨样细胞或人牙周膜细胞成骨分化及相关基因表达的影响，了 解牵张应力对 ERK1/2 与 NF-kB 信号通路的影响及两条通路之间的相互作 用关系。 实验一：牵张应力对 MC3T3-E1 细胞成骨分化及相关基因表达的影响 本研究通过 MC3T3-E1 成骨样细胞体外培养，观察不同大小牵张应力 刺激后，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、I 型胶原（COLⅠ）、骨保 护素(osteocalcin,OCN)、白细胞介素-6 等基因表达的变化，研究发现，在 8% 及 12%细胞形变率的周期性牵张应力作用下，MC3T3-E1 细胞碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP)活性及骨保护素(osteocalcin,OCN)基因的表达明 显降低， 而 ALP 是成骨细胞早期分化的标志， OCN 是成骨细胞成熟的标 志。结果表明，MC3T3-E1 细胞在 8%及 12%细胞形变率的周期性牵张应力 作用 24 小时后抑制了其向成熟的成骨细胞分化的能力。同时研究发现，牵 张应力作用 24 小时后，I 型胶原（COLⅠ）、白细胞介素-6（IL-6）基因表 达显著增加。而