茄子solanum melongena l.花药离体培养及其形态发生机制的初步分析-solanum melon genoa l. preliminary analysis of anther culture in vitro and its morphogenesis mechanism.docxVIP

中文摘要摘要本试验以3个茄子品种(渝研一号、三月茄、萍早秋一号)为材料.通过花药愈伤组织的诱导、增殖和分化培养，获得了一定数量的单倍体植株，并对小T包子的发育动态、愈伤组织的分化做了组织细胞学和生理生化方面的研究。主要的工作和结果分述如下z1材料的选取和即回取不同发育期的花营，用矶和确化锦染色液染色压片镜检，选花粉发育为单核中期或单核中晚期的花药进行离体法养.花沓的发育形态与花粉发育时期的相关性因品种与外界条件而异，-R2:以花尊刚刚裂开，还未开放，花冠包含在喜事片之中、呈绿臼色为宜.此时花药*7厘米左右。将来回来的花蕾大部分用湿纱布包裹放于温度为5-6C冰箱中进行低温预处理，其余部分于接种后进行常规培养(对照〉或热激处理.2茄子花蕾适窒消毒方法的建立茄子花蕾外被大量的绒毛.故花蕾的消毒是花药箱养中是基础的一环.试验结果表明2次氯酸纳的消毒效果差，单纯氯化霖的消毒效果也不好，最佳的消毒万法为70%酒精预处理30秒后，用0.1%的氯化示滴加一滴吐温消毒10-12分钟。3花药愈伤组织的诱导将茄子花药接种到培养基上对其培养的最适激素、有机物质组合、低温预处理时间、热激处理时间、戴糖浓度进行筛选。试验结果表明，茄子花药愈伤组织的诱导受多种因素的影响。其中茄子花药愈伤组织培养的撮适激素、有机物质组合为13+培养基中添加2，今二氯苯氧乙酸1.0毫克，激动素。.5毫克，水解乳蛋白l克和谷氯联黯500毫克5-6C下最适低温预处理时间为48-72小时;33C下最适热激处理时间为48.....60小时，热激处理和低温预处理的效应没有叠加作用3最适.i!.糖浓度为1升培养基中添加.i!.糖30-40克.在各种最运条件下，渝研一号、三月茄、萍早秋一号的愈伤诱导率分别达到了12.00%、7.00%、25.00%左右。4花药愈伤组织的分化和不定芽的生根将诱导和增殖培养产生的具形态建成愈伤组织转到不同分化培养基上诱导不定芽的产生.结果表明最适的分化培养基为l开MS培养基中添加玉米索1.0毫克.。茶乙酸0.001-O.∞5毫克，赤霉素。5毫克以及水解乳蛋白l克。在最适分化培养基上，渝研一号、三月茄、薄早秋一号的分化率分别达到了33.33%、24.00%、68.89%.随后将产生的不定芽转到1/2MS附加α茶乙酸。-0.005毫克/升、震、糖20克/升的生根培养基中生根良好，移栽存活率达90%以上。5单倩体植栋的鉴定和倍性变化将培养获得的再生植株取其根尖用去壁低渗法逃行染色体的f击性鉴定。结果显示，在鉴定的95株花药培养植株中，单倍体、二倍体、三倍体、四倍体及非整倍、混倍体的比例分别为16.84%、54.74%、4.21%、9.47%和14.74%.但3个基因型的花培茵群体的倍性比例分布有西南农业大学硕士学位论文所不同伊8小袍子发育动态观察在花药接科后的第三5、io、15天各取样一次观察花药离体培养过程中小炮子的发育动态(以萍阜秋-号为研究对象).用卡宝品红染色法分别制成花粉粒涂片，用显微镜进行细胞学观察和显做摄影。结果显示，雄核发育的启动及多细胞花粉的形成并不要求培养基中必须有外源;敏索存在，但外在事激素在茄子花药离休培养前期几天内对雄核发育的启动和多细胞花粉的形成有促进作用.ep促使有更多的花粉由配子体发育转向于包子体发育而形成多细胞花粉。同时试验中观察到了茄子花药离体培养中花粉细胞分裂的两种途径·营养核分裂途径和花粉均等分裂途径。7具形态建成愈伤组织分化的组织细胞学观察在不定芽发生过程中(以萍早秋一号为研究对象).从接入具形态建成愈伤组织块起在0、1、3、6、9、12、15、18天时取材，用纳瓦兴氏液III固定，爱氏苏木精染色，石蜡包埋切片，切片厚度10微米，显微观察照相。具形态建成愈伤组织转接到分化培养基上后，表面和内部的具形态建成细胞逐渐形成两个分生中心，即分生细胞团和分生组织结节，以后前者发育成了芽原基，后者发育成了根原基。B愈伤组织分化的生理生化指标测定:本试验分别测定了具形态建成和不具形态建成愈伤组织分化时的多项生理生化指标(以萍早秋一号为研究对象):过氧化物酶同工酶港带变化、过氧化物酶活性、可溶性糖、淀粉、蛋白质和核酸含量.从而较系统地从多角度对两类愈伤组织分化时的生理生化变化进仔了研究.结果表明，在转入分化培养基前具形态建成与不具形态建成愈伤组织的酶谱基本相同，都有B、E、G、H、I带，但前者酶带相对要浓，同时前者比后者多了一条谱带c..c带在具形态建成愈伤组织分化的过程中始终存在:其他生理生化指标也是前者高于后者，在分化过程中，具形态建成愈伤组织要比不具形态建成愈伤组织多产生3条谱带.epi普带A、D、J，其它生理生化指标的变化前者也要比后者剧烈得多.与此同时，在具形态建成愈伤组织的3个处理中，处理I、II的各生理生化指标变化趋势基本相似