前列腺癌血清mirnas表达谱的检测和mir-101靶向ezh2调控作用的初步研究-detection of mirnas expression profile in prostate cancer serum and preliminary study of mir - 101 targeting ez h2 regulation.docx

第二部分miR-101和EZH2在前列腺癌中的表达以及miR-101靶向EZH2对PC3细胞生物学行为的影响目的：通过检测前列腺癌及正常前列腺上皮细胞中miR-101和EZH2的表达水平，利用合成的miR-101mimics转染前列腺癌PC-3细胞并观察对其生物学行为的影响，从而分析在前列腺癌中miR-101与EZH2的靶向调节效应和作用机制。方法：运用实时定量PCR（Real-timequantitativePCR）检测前列腺癌PC-3细胞、LNCaP细胞和前列腺正常上皮RWPE-1细胞中miR-101和EZH2mRNA的表达；应用Western-Blot蛋白印记法检测上述细胞中EZH2的蛋白表达水平；PC-3细胞分为三组：不转染的空白对照组（B组）；转染NC的阴性对照组（NC组）；转染miR-101mimics的实验组（miR-101组）。通过miR-101mimics转染前列腺癌PC-3细胞并上调细胞中miR-101的表达，Real-timeqPCR和Westernblot检测细胞中EZH2表达水平的变化；应用噻唑蓝比色法（MTT法）测定细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期；AnnexinV/PI双染色法测量细胞凋亡率；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力。对所有数据进行统计学分析。结果：（1）miR-101在PC-3细胞和LNCaP细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞，miR-101在前列腺各细胞株间的表达具有显著差异性（P0.05）。（2）EZH2mRNA在PC-3细胞和LNCaP细胞中的表达明显高于RWPE-1细胞，EZH2蛋白在PC-3细胞和LNCaP细胞中的表达也明显高于RWPE-1细胞，EZH2mRNA和蛋白在前列腺各细胞株间的表达具有显著差异性（P均0.05）。miR-101的表达量与EZH2表达量呈负相关趋势（P0.05）。（3）miR-101mimics转染PC-3细胞后，细胞中的miR-101表达上调（P0.05），而EZH2mRNA和蛋白表达水平也明显降低（P0.05）。（4）MTT法检测结果显示：转染后48、72、96小时miR-101组细胞增殖明显低于B组和NC组（P0.05），两对照组无显著性差异（P0.05）。（5）流式细胞仪测定结果显示：转染后48小时，miR-101组发生了G0/G1期阻滞（P0.05），B组和NC组细胞周期分布无显著差异（P0.05）。（6）细胞凋亡率检测结果显示：转染后48小时，B组、NC组及miR-101组PC-3细胞凋亡率分别为：2.53±0.36%、2.71±0.42%、9.84±0.83%，miR-101组凋亡率明显高于两对照组（P0.01）。（7）划痕实验检测结果显示：miR-101组细胞迁移能力明显低于对照组（P0.01）；两对照组无显著性差异（P0.05）。中文摘要前列腺癌血清miRNAs表达谱的检测和miR-101靶向EZH2调控作用的初步研究（8）Transwell侵袭实验结果显示：miR-101组穿过Matrigel凝胶的细胞数显著少于B组和NC组（P0.01），两对照组间无显著性差异（P0.05）。结论：（1）前列腺癌细胞中miR-101表达量较正常前列腺细胞降低，而EZH2的表达量则上调；提示异常表达的miR-101和EZH2均参与了前列腺癌的发生发展；两者表达呈负相关提示EZH2可能是miR-101负向调控的靶基因之一。（2）miR-101在AIPC细胞中表达水平低于ADPC细胞，EZH2的表达则相反；提示两者可能在激素非依赖性转化过程中起着一定的作用。（3）miR-101丧失对EZH2表达的抑制导致EZH2异常高表达可能是前列腺癌发生的重要机制；在前列腺癌PC-3细胞中上调miR-101能够抑制EZH2的表达。（4）上调miR-101的表达能显著抑制PC-3细胞的增殖和促进其凋亡，还能够降低PC3细胞的迁移和侵袭能力。关键词：miR-101；EZH2；PC-3；增殖；细胞周期；凋亡；迁移；侵袭作者：丁翔指导教师：严春寅浦金贤DetectionserummiRNAsexpressionprofilesofprostatecancerandPreliminaryStudyonregulatingfunctionofmiR-101targetingtoEZH2AbstractProstatecancer(PCa)isoneofthemostcommonmalignanttumoursinurinarysystem.Radicalprostatectomy,hormonaltherapy,radiotherapyandchemotherapyareconsideredasmajortherapeuticapproach