砷剂与槲皮素对急性t淋巴细胞白血病dll4notch1通路作用机制的研究-study on the mechanism of arsenic and quercetin on dll 4 notch 1 pathway in acute t lymphocyte leukemia.docxVIP
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- 2018-07-31 发布于上海
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砷剂与槲皮素对急性t淋巴细胞白血病dll4notch1通路作用机制的研究-study on the mechanism of arsenic and quercetin on dll 4 notch 1 pathway in acute t lymphocyte leukemia
上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日砷剂与槲皮素对急性T淋巴细胞白血病Dll4/Notch1通路作用机制的研究摘要目的和意义:Dll4/Notch与VEGF信号通路是肿瘤血管新生最主要的调控因素。急性T淋巴细胞白血病(TAcutelymphoblasticleukemia,T-ALL)是一种高度恶性的血液系统恶性肿瘤,研究发现超过50%(T-ALL)患者存在Notch1基因突变,导致Notch信号通路过度激活,并可作为其独立预后因子。但有关Dll4/Notch参与T-ALL发病和血管新生作用机制的研究,目前尚无报道。本课题拟在体外T-ALL细胞株和体内Tg(rag2-ICN1-RFP/fli1-EGFP)转基因斑马鱼模型中探讨药物对Dll4/Notch信号通路的影响,为T-ALL的临床靶向治疗提供新的治疗策略。方法:采用RT-PCR检测正常人外周血淋巴细胞与急性淋巴细胞白血病细胞株A3和Molt-4中Notch1基因mRNA的相对表达量,验证Notch1mRNA表达情况。经不同浓度三氧化二砷(arsenictrioxide,ATO)与槲皮素(quercetin)处理细胞后,应用CCK8试剂盒检测细胞活力,显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RFQ-PCR检测Dll4/Notch1与VEGF信号通路相关基因的表达水平,蛋白质免疫印迹法检测细胞内Dll4/Notch1与VEGF信号通路相关蛋白及Caspase-3凋亡蛋白的表达情况。收集Tg(rag2-ICN1:RFP/fli1:EGFP)斑马鱼的胚胎,于受精后14h(hourspostfertilization,hpf),应用不同浓度(50、100、150μM)ATO或不同浓度(80、160、240μM)槲皮素处理72h后,在荧光显微镜下观察斑马鱼形态学改变及血管抑制情况,并应用RFQ-PCR检测斑马鱼中Dll4/Notch1与VEGF信号通路相关基因的表达情况。结果:ATO可显著抑制T-ALL细胞株的增殖活性,并下调Notch1、Hes1、Dll4及VEGFmRNA与蛋白的表达。此外,ATO可抑制Tg(rag2-ICN1:RFP/fli1:EGFP)斑马鱼发育过程中肠下静脉(SIVs)的形成。150μMATO基本上可完全抑制SIVs形成。槲皮素抑制ALL细胞株的增殖活性并诱导其凋亡,且呈时间和浓度依赖性;与此同时,槲皮素可下调Notch1、Hes1、Dll4、VEGF等基因及蛋白的表达水平。槲皮素(quercetin)可有效抑制Tg(rag2-ICN1:RFP/fli1:EGFP)斑马鱼肠下静脉(SIVs)及节间血管(ISV)的形成。结论:ATO与槲皮素通过抑制ALL细胞株Dll4-Notch1与VEGF信号通路的表达,抑制其增殖并诱导凋亡;ATO与槲皮素通过抑制Dll4/Notch1与VEGF信号通路抑制斑马鱼血管新生。关键词:Dll4-Notch1,三氧化二砷,槲皮素,A3与Molt-4细胞株,斑马鱼AbstractObjectiveandSignificance:Thevascularendothelialgrowthfactor(VEGF)andNotch/Dll4pathwayshavebeenidentifiedcriticalinregulationofembryonicvasculardevelopmentandtumorangiogenesis.Tcellacutelymphoblasticleukemia(T-ALL)isahighlyaggressivehematologicmalignancy.ActivatingmutationsintheNotch1genehavebeenfoundinabout50%ofpatientswithT-cellacutelymphoblasticleukemia(T-ALL),whichcanbeusedasanindependentprognossticfactors.ButthereisnoreportsabouttheeffectofDll4/NotchsignalingpathwayinT-ALLpathogenicmechanismandangiogenesisresearch.Inthepr
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