石墨烯修饰玻碳电极用于急性早幼粒细胞白血病pmlrarα融合基因检测的实验研究-experimental study on graphene modified glassy carbon electrode for detection of pml rar α fusion gene in acute promyelocytic leukemia.docxVIP

石墨烯修饰玻碳电极用于急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测的实验研究中文摘要随着基因工程的迅速发展,分子诊断技术在过去几十年里得到了长足的进步。其中电化学DNA生物传感器对基因序列的明确分析近年来得到了快速发展,随着DNA合成技术以及微电子技术的发展,使DNA生物传感器的发展更趋于完善。电化学DNA生物传感器是近年来发展起来的一种新型的生物传感器。它能将目的DNA的存在转换为电信号，又因为本身具有灵敏度高、特异性好，成本较低、容易操作、简单化、并能与其它仪器兼容的特点,因而发展非常迅速，对临床医学和遗传工程的研究具有深远的意义和应用价值。核酸探针技术是随着基因工程技术发展而发展起来的一种前沿生物技术，具有灵敏度高、专一性强、快速准确等特点，在生物大分子研究、临床疾病诊断和治疗等方面发挥出巨大作用。纳米技术是20世纪80年代末90年代初发展起来的一门多学科交叉的新兴学科，它的发展开辟了人类认识世界的新层次。其中，纳米材料是纳米技术的一个重要部分，纳米材料具有的表面效应、小尺寸效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应使其在力学、电学、磁学、热学、光学以及化学活性等特殊的性质。而纳米材料中的碳材料则是最近研究的热点，如富勒烯、碳纳米管和石墨烯等。石墨烯是第三个也是最新被发现的“新型碳材料”，石墨烯具有巨大的比表面积，较大的吸附性能和较快的电子传递速度及电催化活性等相关优势。本文主要利用电化学还原法将固定在玻碳电极表面的氧化石墨还原为石墨烯，制备石墨烯修饰玻碳电极，并利用电化学方法对石墨烯修饰玻碳电极进行了表征。以亚甲基蓝为电活性模型分子，研究制备的石墨烯修饰玻碳电极的对亚甲基蓝的电化学催化性能，结果玻碳电极表面氧化石墨被电化学还原成石墨烯，成功制得石墨烯修饰玻碳电极；修饰电极稳定性良好，并对亚甲基蓝的氧化还原电流起到了极大增敏作用，电催化性能良好。在此基础上，将制备的石墨烯修饰玻碳电极用于急性粒细胞白血病PML/RARα融合基因的检测。利用偶联活化剂将氨基修饰的急性早幼粒细胞白血病（APL）PML/RARα融合基因序列探针固定到石墨烯修饰电极表面，以亚甲基蓝为电化学杂交指示剂，并由差分脉冲伏安法检测人工合成APL的PML/RARα融合基因。结果表明，石墨烯对MB的检测信号起到了很好的增敏作用，杂交前后MB还原峰电流差值与靶标链DNA浓度在5×10-10~2.5×10-9mol/L范围内呈线性关系，检出限为8×10-11mol/L。同时也考察了该传感器的特异性、稳定性等性能，该方法简单、特异性好，有望用于实际样品的检测。关键词:石墨烯；氧化石墨；石墨烯修饰玻碳电极；电化学DNA生物传感器；亚甲基蓝；PML/RARα融合基因；急性早幼粒细胞白血病TheDetectionofAcutePromyelocyticLeukemiaPML/RARαFusionGeneUsingGrapheneModifiedGlassyCarbonElectrodeABSTRACTWiththerapiddevelopmentofgeneproject,moleculardiagnostictechniqueshavebeenimprovedinthepastseveraldecades.Amongthem,clear-cutanalysisofgenesequenceusingelectrochemicalDNAbiosensorhasbeendevelopedfastinrecentyears.WiththedevelopmentofDNAsynthesistechnologyandmicroelectronictechnology,theprogressofDNAbiosensorbecameflawless.ElectrochemicalDNAbiosensorisanovelkindofbiosensorgrowninrecentyears.ItcanchangetheexistenceoftargetDNAintoelectricalsignal.Becauseofitadvantages,suchashighsensitivity,goodspecificity,lowcost,easyoperation,simplifyandcompatibilitywithotherequipmentandsoon,thebiosensordevelopsveryfastandshowsthefar-reachingsignificanceandapplicationvalueforthestudyofclinicalmedicineandgeneticengineering.Nucleicacidprobetechnologywhichisafro