P53Grb7在胃肠道间质瘤中表达及临床意义.docVIP

P53Grb7在胃肠道间质瘤中表达及临床意义 　　【摘要】目的探讨P53、Grb7在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达及其与GIST生物学行为的关系，为预测该肿瘤的侵袭潜能提供理论依据和可能的预测指标。方法收集58例手术切除的GIST标本，应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P53和Grb7蛋白的表达，并结合病理形态学及生物学行为评价进行统计学分析。结果肿瘤组织中的P53、Grb7阳性率分别为85.2%、83.3%，并随着GIST恶性分级的增高，其表达均出现递增趋势，差异有统计学意义（P0.05）；与生长方式、肿瘤大小、肿瘤中心有无坏死、肿瘤细胞特殊排列结构亦有明显关系（P0.05）。结论P53、Grb7蛋白表达与GIST的发生、发展有关，检测P53、Grb7表达结合特殊病理学形态可以作为评价GIST生物学行为及预后的客观指标。 　　【关键词】 　　胃肠道间质瘤；P53蛋白；Grb7蛋白；免疫组织化学方法 　　P53是目前研究最为广泛深入的抑癌基因之一，生长因子受体结合蛋白7（growthfactorreceptorboundprotein7，Grb7）是新近发现的信号联结蛋白，该蛋白主要是介导各种细胞表面受体和特异性下游信号的耦联，与细胞增殖及肿瘤转移有关[1]，二者在胃癌、乳腺癌、食管癌组织中有高表达，P53、Grb7蛋白已被证实是较好预后标志物。有关P53、Grb27蛋白在胃肠道间质瘤（gastrointestinalstromaltumors，GISTs）中的表达情况，尚未见国内外文献报道。因此，检测GIST中P53、Grb7的蛋白表达，分析其与临床病理特征的关系，探讨P53，Grb7预测胃肠道间质瘤（GIST）恶性潜能及生物学行为、判断预后的意义。 　　1资料与方法 　　1.1选取郑州人民医院普通外科2007年1月至2012年12月手术切除经病理证实且免疫组化均表达CD117或CD34为阳性的胃肠道间质瘤58例；复阅切片重新诊断。其中男性32例，女性26例，年龄分布32～74岁，中位年龄52.6岁，所有患者术前均未接受化疗、放疗、免疫治疗及其他针对肿瘤的治疗。按2001年美国国立卫生研究院（nationinstituteofhealth，NIH）诊断标准，根据肿瘤大小、每50高倍镜视野下核分裂计数将58例为：极低度侵袭危险性6例、低度侵袭危险性12例、中度侵袭危险性22例和高度侵袭危险性18例四组。 　　1.2所有标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片4张，2张分别用于P53、Grb7免疫组织化学检测，1张作HE染色，1张用PBS代替一抗作阴性对照。检测方法采用免抗P53多克隆抗体及S-P免疫组化染色试剂盒均购自武汉博士德生物技术开发公司。Grb7试剂盒购自SantaCruz公司（单抗，1∶100）。操作按试剂盒说明书进行。已知P53，Grb7阳性的乳腺癌作为阳性对照。 　　1.3结果判定P53蛋白主要在细胞核内表达，以胞核内出现棕黄色染色为阳性染色，光镜下观察整个切片，高倍镜下（10×40）随机观察5个视野，以阳性细胞百分率为判定标准，阳性细胞10%判定为阳性。阳性细胞为细胞膜或胞质棕黄着色。光镜下观察整个切片，高倍镜下（10×40）随机观察5个视野，以阳性细胞百分率为判定标准，无阳性细胞或阳性细胞5%为“-”；阳性细胞数5%～25%为“+”；阳性细胞数26%～50%为“++”；阳性细胞数为50%为“+++”。 　　2结果 　　2.1P53、Grb7在GIST中的表达及其与临床病理联系 　　3讨论 　　GISTs的良恶性缺乏明确的诊断标准，准确预测GISTs生物学行为十分困难。在实际工作中，我们一般根据肿瘤大小、核分裂像的多少。但是，一些直径2cm，核分裂像为1个/50HPF，病理诊断为良性，却在10年或更长时间发生转移。 　　P53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，50%以上人类恶性肿瘤都可检测到P53基因突变。P53基因可分为野生型P53（wt-p53）和突变型P53（mt-p53）[2]，野生型P53基因功能与细胞分化、DNA合修复以及细胞程序性死亡有关。主要参与细胞周期G1/S交界处检查点的检查机制，负责检查细胞基因组的完整性[3，4]。它强迫具有DNA损伤的细胞在G1期进行修复后进入S期，如修复失败，则P53蛋白可启动细胞发凋亡。野生型P53对于肿瘤具有抑制细胞增殖，诱导凋亡，诱导分化的作用，它通过控制与细胞调控，从而达到抑制癌的目的。突变型P53基因由于失去正常功能而使P53蛋白在细胞中堆积，造成P53蛋白含量升高，抑制细胞凋亡，促进细胞转化和增殖，导致肿瘤的发生。P53基因发生突变时，半衰期明显延长，比正常细胞高出100～1000倍，这是应用免疫组