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P53表达对结肠癌肝转移临床预测价值 　　【摘要】 目的 探讨P53阳性表达对结肠癌早期肝转移的预测价值。方法 采用免疫组化Elivision法检测52例结肠癌标本的P53表达，并完成2年随访，对其表达率行相关性分析。结果 P53的阳性表达在大肠癌Dukes分期、淋巴结有无肿瘤细胞转移及随访2年后有无肝转移中均有显著性差异(P0.05)。 结论 P53的表达对结肠癌早期肝转移有一定的预测作用，有益于临床对结肠癌的评估、治疗。 　　【关键词】 P53；结肠癌肝转移；预测 　　文章编号：1003-1383(2007)02-0122-03 　　中图分类号：R 735.35 文献标识码：A 　　结肠癌是我国较常见的恶性肿瘤之一，其发病率位居第5位，在消化道恶性肿瘤中居第3位。其中结肠癌合并肝转移相当常见,15%―25%的结直肠癌患者在原发肿瘤诊断时即有肝转移,20%左右的患者在原发肿瘤治疗后随访期出现肝转移［1］,20%―35%的患者表现出肝脏为唯一转移部位［2］。目前在结肠癌肝转移早期尚无有效检测措施，寻找预测结肠癌肝转移的指标对指导临床治疗、提高结肠癌患者的预后具有重要意义。我们应用免疫组化，检测52例结肠癌组织及淋巴结中P53的表达，并且对随访满2年的患者进行P53表达的重新统计，探讨P53的表达与结肠癌发展、结肠癌肝转移之间的关系。 　　 　　材料与方法 　　1.材料 收集我院2002年4月―2004年5月期间手术切除原发性结肠癌标本52例，所有病例术前均未行化疗、放疗或免疫治疗，术前肝功能Child分期均为A期，术前B超或CT、术中探查均未提示肝转移，术后结肠癌均经病理证实。52例中男性36例，女性16例，年龄38―72岁，平均年龄50.5岁。到2006年6月止，52例随访中完成随访46例，失访6例，随访率88.46％，随访期间患者均实行5-FU/CF联合化疗。 　　2.方法 52例新鲜标本用10％福尔马林常规固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，载玻片经多聚-L-赖氨酸防脱片处理。①石蜡切片80℃烤片30 min。②组织切片脱蜡，梯度酒精脱水：放入二甲苯15 min×3次，放入100%乙醇×2次，95％乙醇×2次，80％乙醇×1次，流水冲洗5 min。③抗原修复：0.1 mol/L枸橼酸缓冲液pH 6.0。操作步骤：电饭煲于耐高温塑料切片架上，放入盛有酸缓冲液的耐高温容器皿内，再放入电饭煲中煮10 min，拔去电源插头，保温20 min，取出后冷却至室温。④蒸馏水洗，磷酸缓冲液(PBS)洗，3 min×2次。⑤滴加一抗50―80 μl/张切片，湿盒孵育，4℃冰箱过夜。⑥次日晨，PBS洗3遍，滴加二抗59―80 μl/张切片，湿盒孵育，室温l h左右。⑦PBS洗3遍，滴加100 μl新鲜配制的DAB显色3―10 min。⑧自来水冲洗，苏木精复染15 s，盐酸乙醇分化3 s，温水兰化，梯度乙醇脱水，80％乙醇→乙醇95％→纯乙醇，吹干，中性树胶封固。⑨镜检。 　　3.阳性结果判断 免疫组化染色采用Elivision法，鼠抗人单克隆抗体P53(MAB-0142)与免疫组化染色孵育盒均为美国Maxin公司产品(购自福州迈新生物技术公司)，染色设对照组，以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。细胞核呈现清晰的棕黄色颗粒为阳性，按阳性细胞所占的比例及显色深度分为：①阴性(-)：阳性细胞数50％，显色深，颗粒粗。 　　4.统计学处理 采用χ2检验，P0.05为有显著性差异。 　　 　　结果 　　1.P53表达与Dukes分期的相关性 52例大肠癌标本中P53蛋白表达阳性38例，阳性率73.08％。按Dukes分期分类，A、B期共19例，P53阳性表达10例，阳性率52.63％，C、D期共33例，P53阳性表达28例，阳性率84.85％，P53在C、D期的阳性表达显著高于A、B期(P0.05)，见表1。 　　2.P53表达与淋巴转移的相关性 本组发生淋巴结转移49例，其中P53阳性表达46例，阳性率93.88％，无淋巴结转移3例，其中P53阳性表达1例，阳性率33.33％，有淋巴结转移者的阳性表达显著高于无转移者(P0.05)，见表2。 　　3.P53表达与肝转移的相关性 完成2年随访的46例患者，B超或CT检查发现其中有肝转移者21例，其大肠癌标本中P53蛋白表达阳性19例，阳性率90.48％，检查未发现肝转移25例，其大肠癌标本中P53蛋白表达阳性15例，阳性率60.00％，有肝转移者的阳性表达显著高于无转移者(P0.05)，见表3。 　　 　　讨论 　　人类P53基因定位于17号染色体短臂1区3.1带(17 P 13.1)，是一个非常重要的抑癌基因，全长16―20 kb，基因组有1