P16蛋白在正常宫颈CIN宫颈癌组织中表达差异及意义.docVIP

P16蛋白在正常宫颈CIN宫颈癌组织中表达差异及意义 　　【摘 要】目的：探讨P16蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasias，CIN）、宫颈癌组织中的表达差异及意义。方法：收集本院2012年10月～2013年10月行除的宫颈癌（3例）、CINⅡ、Ⅲ（61例）组织的石蜡标本64例进行研究，并收集30例正常宫颈组织标本作为对照组。利用免疫组织化学技术对所有标本进行检测，得出其中的P16蛋白表达情况。结果：在CIN组织和宫颈癌组织中，较之正常的宫颈组织，p16蛋白的阳性表达率显著增加。而将宫颈癌组织与正常宫颈组织，以及正常宫颈组织和CIN组织，还有CIN组织与宫颈癌组织进行两两对比，可以发现不同组织的p16蛋白阳性表达率经比较均存在显著差异。结论：16蛋白在正常宫颈、CIN以及宫颈癌组织中的表达存在较大的差异，临床可以将16蛋白作为宫颈癌筛查的重要指标之一。 　　【关键词】宫颈;宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasias，CIN）;宫颈癌;P16蛋白;表达 　　宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasias，CIN）是一组与宫颈癌关系较为密切的病变，研究发现，P16蛋白是一种抗癌基因，广泛存在于人体的宫颈细胞之中，与宫颈上皮内瘤变等关系密切[1]。一旦，P16蛋白发生变异，便会逐渐转化为恶性细胞。因此，临床积极对p16蛋白正常宫颈和CIN以及宫颈癌组织中的表达水平进行研究，可以帮助人们更好的了解疾病的发生与发展等，提高临床治疗的准确性，具有较强的现实意义[2]。本研究中，笔者收集本院2012年10月～2013年10月行除的宫颈癌（3例）、CINⅡ、Ⅲ（一共61例）组织的石蜡标本64例进行研究，并收集30例正常宫颈组织标本作为对照组，探讨P16蛋白在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中的表达差异及意义。现将研究结果进行如下报告。 　　1一般资料和方法 　　1.1一般资料 　　收集本院2012年10月～2013年10月行除的宫颈癌（3例）、CINⅡ、Ⅲ（61例）组织的石蜡标本64例进行研究，患者年龄23 ～ 59岁。另外，从同期在本院接受健康体检的健康人群中收集30例正常宫颈组织标本作为对照组。研究获得医学伦理学相关部门同意，所有患者均了解研究相关情况，并签署知情同意书，自愿参与研究。 　　1.2方法 　　利用免疫组织化学技术对所有标本进行检测，分析其P16蛋白表达情况。 　　1.2.1试剂 　　（1）p16鼠抗人单克隆抗体购自上海天呈医流科技股份有限公司;（2）超敏SP（鼠/兔）试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司;（3）AB酶底物显色剂购自上海领潮生物科技有限公司;（4）PH 6.0枸橼酸缓冲液（自配）（5）0.01MPH7.4 PBS缓冲液（自配）。 　　1.2.2仪器和设备 　　（1）医用净化工作台购自北京东联哈尔仪器制造有限公司;（2）单道可调式微量移液器购自上海艾研生物科技有限公司;（3）双目光学显微镜购自上海明兹仪器有限公司;（4）推拿式切片机购自香港万浩科技有限公司;（5）隔水式电热恒温培养箱购自上海玺恒实业有限公司;（6）生物组织摊烤片机购自湖北康益达医疗科技有限公司; 　　1.2.3检测方法 　　将购买试剂时提供的p16阳性切片作为阳性对照，将购买磷酸盐缓冲液PBS代替一抗作为阴性对照。利用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接（S-P法）检测不同组织中的p16表达情况。 　　1.3检测结果判定标准 　　p16蛋白的蛋白产物位于细胞核或者细胞浆，如果为阳性，则呈黄色或棕黄色。计数：利用100倍显微镜，观察每张切片 10个以上的独立视野，选取其中阳性细胞数最多的5个视野，继续利用400倍视野予以记数，将5个视野平均值作为最终结果。根据阳性细胞比例和分布情况进行判定：（1）阴性（-）：单个细胞染色，阳性细胞数小于5%，（2）弱阳性：（+）小的或散在细胞团染色，阳性细胞数5%～24%;（3）中度阳性（++）：簇状或者片状细胞染色，阳性细胞数25%～50%;（4）强阳性（+++）：弥散细胞染色，阳性细胞数在50%以上。（5）过表达。（++-+++）。本研究中，弱阳性表达以下均计为阴性，过表达视为阳性。 　　1.4统计学处理 　　研究所得数据均输入Excel表格，并使用SPSS 公司推出的SPSS 15.0软件进行统计分析，研究所得计数资料均进行Χ2检验，计量资料均进行t检验。并以P0.05作为差异有统计学意义的标准。 　　2结果 　　经统计和检测，p16蛋白在不同宫颈组织中的表达情况存在显著差异，（P0.05）。其中，在CIN组织和宫颈癌组织中，较之正