Th17细胞及IL―17表达水平在脊柱结核患者病情发展中意义分析.docVIP

Th17细胞及IL―17表达水平在脊柱结核患者病情发展中意义分析 　　摘要目的：探讨脊柱结核外周血中Th17细胞的数量变化及IL-17表达，寻求治疗新靶点。方法：收治脊柱结核患者30例，选择健康者30例，均检测外周血单核细胞中Th17细胞比例和血浆中IL-17含量。结果：脊柱结核组治疗前Th17细胞数量高于健康组（P0.05），结核组术后12个月的Th细胞数量和IL-17量较术前明显降低（P0.05）。结论：Th17细胞和IL-17因子是介导脊柱结核病情发展的重要免疫因素，Th17细胞和IL-17可能是脊柱结核患者在细胞免疫治疗方面的一个新靶点。 　　关键词Th17细胞；IL-17表达水平；脊柱结核 　　脊柱结核是常见的脊柱感染性疾病，随病情进展可出现严重的脊柱和周围软组织破坏，甚至导致神经系统损伤，对患者的健康和生活产生严重的影响。目前，虽有学者对脊柱结核损伤的发病机制进行了大量研究，但尚没有确切的定论，多数学者认为可能与结核杆菌大量复制所造成的直接损伤和免疫介导等因素有关。Th17细胞是新发现的CD4辅助T细胞亚群，参与多种炎症感染及自身免疫疾病的组织损伤。研究表明，肺结核患者的胸水及外周血中可检测到IL-17 mRNA表达，且外周血IL-17的表达比正常对照组显著增高，组织细胞中有IL-17蛋白表达，组织中存在Th17细胞，提示Th17细胞亚群及其效应分子IL-17参与了结核的病理过程。本项目目的是初步探讨脊柱结核外周血中Th17细胞的数量变化及IL-17表达情况的分析，并寻求脊柱结核的治疗新靶点。 　　资料与方法 　　样本采集及处理：分别于术前及术后1周、1个月、6个月、12个月采集30例脊柱结核患者（年龄30～71岁）外周血标本，并按上述时间点采集30例健康者的外周血作为对照，每例抽取30 mL外周血，在血液标本中加入人淋巴细胞分层液后离心处理（室温，2 000 rpm，30 min），分离出外周血单核细胞及血浆，血浆于低温保存，待ELISA法检测IL-17。本研究经柳州市工人医院伦理委员会审批同意。 　　主要试剂及仪器：人细胞因子IL-17酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购于上海酶联生物科技公司，PE-抗人CD4单克隆抗体、FITC-抗人IL-17单克隆抗体购于上海谷研科技有限公司，流式细胞仪为BD FACSCalibur flowcytomeler，软件为FCS ExpressV3。 　　流式细胞术检测外周血单核细胞中Thl7细胞比例：取外周血制成悬液，调整细胞密度至1×10/mL，接种于24孔板，加入PMA（50 ng/mL；Mdrich，St.Louis，MO）、离子霉素（1μg/mL）和莫能新（2μmol/mL），置于恒温箱（37℃，5%C02）培养6 h。加人PE-抗人CD4单克隆抗体10 μL，避光室温染色30min，以4%多聚甲醛固定，破膜剂破膜后加FITC-抗人IL-17单克隆抗体10μL，室温染色30 min，洗涤后重悬细胞，用流式细胞仪检测。 　　IL-17水平测量：取上述血浆用ELISA法测量IL-17含量，具体按照ELISA试剂盒（RD Systems，Minneapolis，MN）说明书的方法进行，所有标本均双份测量，读取酶标仪450 nm处0D值。 　　统计学方法：采用SPSS 13.0分析，计量资料采用（x±s）表示，t检验，计数资料使用率（%）表示，x2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　结果 　　一般资料比较：所有受试者均为汉族，30例脊柱结核患者中，男16例，女14例，年龄19～68岁，平均45.5岁；健康对照组中，男15例，女15例，年龄18～66岁，平均46.2岁。脊柱结核患者组与健康对照组在人种、年龄、性别方面相比差异无统计学意义（P0.05）。 　　外周血单核细胞中Thl7细胞比例：流式细胞仪检测外周血单核细胞中CD4及IL-17均阳性的细胞为Th17细胞的比例。比较脊柱结核及健康者各个时期的Th17细胞比例：脊柱结核患者术前及术后1周、1个月、6个月、12个月的Th细胞比例分别为（9.2±0.9）%、（9.0±0.8）%、（4.2±0.3）%、（3.6±0.3）%、（2.1±0.2）%，健康者术前及1周、1个月、6个月、12个月的Th细胞比例分别为（1.8±0.2）%、（2.2±0.2）%、（2.4±0.3）%、（2.1±0.2）%、（1.9±0.1）%，脊柱结核组治疗前的Thl7细胞数量明显高于健康组（P0.05），但结核组术后12个月的Th细胞数量较术前明显降低，差异有统计学意义（P0.05），见图1。 　　血浆IL-17水平：ELISA法测量结果显示：脊柱结核患者术前及术后1周、1个月、6个月、12个月的IL-17水平为（70